自噬在人偏肺病毒感染中的作用机制研究

发布时间：2021-08-14 09:29

　　人偏肺病毒（human metapneumovirus,hMPV）自2001年荷兰科学家首次从呼吸道疾病患者的气道分泌物中分离发现至今已有19年,在世界各地均有流行,是婴幼儿和免疫功能障碍的儿童引起呼吸道疾病的主要病原体。尽管hMPV已经被发现多年,但目前大部分的研究还是主要集中在流行病学方面,我们对于其感染机制了解还甚少,也没有合适的疫苗和药物可以预防或者控制hMPV感染后在体内的复制。课题组在前期研究中发现该病毒可以通过胞吞的方式进入细胞且与脂筏密切相关。但对于入胞后的相关机制并不了解。本次实验首先对hMPV感染后引起的细胞内机制进行研究,通过LC3间接免疫荧光染色,GFP-RFP-LC3荧光质粒转染,自噬相关基因和通路蛋白的检测以及验证发现hMPV感染后和宿主细胞的相互作用与自噬相关,且该过程有JNK,MEK/ERK通路的参与,病毒诱导的自噬反过来可以抑制病毒在细胞内的复制。本课题的另一部分研究还发现辛伐他汀可以抑制人偏肺病毒的复制且该过程和AKT/mTOR通路诱导的自噬相关,具有一定的抗炎作用。本研究加深了对人偏肺病毒与宿主之间相互作用机制的理解并为病毒的临床治疗提供了理论基础... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人偏肺病毒感染16HBE细胞诱导自噬的发生

重庆医科大学硕士研究生学位论文212.2人偏肺病毒通过JNK和MEK/ERK的通路诱导自噬细胞分为空白组和hMPV感染组（MOI=10），WesternBlot（图1-2）检测hMPV感染后是否可以激活相关通路的表达。病毒感染后提取细胞的蛋白质进行实验发现JNK和MEK/ERK通路的磷酸化表达明显增加。图1-2JNK和MEK/ERK通路蛋白表达Figure1-2TheproteinexpressionofJNKandMEK/ERKpathways2.3验证JNK和MEK/ERK通路的准确性为了验证以上两条通路确实在自噬过程中起作用，我们使用特异性的通路抑制剂来抑制通路再检测自噬相关基因的mRNA和蛋白水平的表达。25μmol/lSP600125和10μmol/lPD98059作用后相关通路JNK和MEK/ERK被沉默，显示低表达状态，自噬标记基因LC3的蛋白质水平表达降低（图1-3A），ATG5,ATG7,Beclin1的mRNA水平表达减低（图1-3B），抑制以上两条通路可以有效抑制自噬。抑制剂处理后感染病毒对细胞进行间接免疫荧光染色，结果显示LC3斑点的ofautophagyrelatedgeneLC3.（D）TheexpressionofautophagyrelatedgeneATG5,ATG7andBeclin1.

hMPV通过JNK和MEK/ERK通路诱导自噬

【参考文献】：
期刊论文
[1]鳞翅目昆虫中自噬相关分子Atg8的研究进展[J]. 王赢,张叶军,黄慧,李洪艳,崔玉影,邹伟.  昆虫学报. 2015(02)
[2]细胞自噬与病毒感染[J]. 陶冶,任晓峰.  病毒学报. 2013(01)



本文编号：3342213