釉成熟蛋白体外诱导釉质仿生矿化能力的研究

发布时间：2021-08-29 20:36

　　目的:探究釉成熟蛋白在体外诱导钙、磷离子矿化及釉质原位再生的能力。方法:1.釉成熟蛋白的重组和表达:从处于釉质发育期的第三磨牙牙胚中提取牙胚细胞的总RNA,通过反转录、扩增的方式得到人cDNA片段,以cDNA作为模板通过RT-PCR获得釉成熟蛋白全长基因。将釉成熟蛋白全长基因与载体连接以构建pET-28a（+）-AMTN表达载体。将pET-28a（+）-AMTN表达载体转入Rosetta（DE3）大肠杆菌感受态细胞,培养、收集蛋白表达产物,蛋白纯化后得到目的蛋白,并经检测后确认为釉成熟蛋白。2.釉成熟蛋白的自组装:将釉成熟蛋白与Tris-HCL/人工矿化液配制为釉成熟蛋白溶液（浓度为100?μg/ml,PH=7.6）在室温下孵育1分钟、10分钟后透射电镜观察自组装过程。3.釉成熟蛋白体的外矿化能力:使用新鲜的完整离体第三磨牙制备牙片,酸蚀、超声清洗、干燥后涂布釉成熟蛋白溶液,室温孵育后置于刚配置好的人工矿化液中37℃培养7天后取样进行扫描电镜、X线衍射分析观察矿化产物表征。结果:1.成功制备并鉴定了釉成熟蛋白。2.透射电镜观察发现釉成熟蛋白1分钟自组装为纳米小球,10分钟、30分钟时纳... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

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【部分图文】：

羟基磷灰石结构示意图[1]

遵义医科大学硕士学位论文张鹏6A.立体结构B.平面结构图1-1羟基磷灰石结构示意图[1]图1-2人牙釉质的七级分级结构示意图[2]2釉质的理化性质牙釉质由无机物、有机物、水组成，若按质量比，无机物、有机物、水分别占96%~97%、2~4%、＜1%；若按体积计算，无机物、有机物、水分别占86%、2%、12%。釉质中的无机物主要为羟基磷灰石，此外，还含有的镁，氟，钠，钾，铁，锰，锶，锌，铅等微量元素。有机物主要为釉质发育过程中所残余的釉基质蛋白和相关蛋白酶。釉质中所含水大多分布在围绕羟基磷灰石晶体的含水层；其余的水则与有机物结合，有助于某些离子通过，使得釉质具有渗透性。釉质分布于牙冠最外层，在前牙切端的厚度约2mm，在后牙牙尖处釉质厚度约为2.5mm，自?方向颈部逐渐变保釉质呈半透明乳白色，若矿化程度越高，则透明程度越高。矿化程度高的牙冠呈淡黄色，是因高度矿化的釉质透射出了牙本质的淡黄色。极高的羟基磷灰石含量及其各向异性巧妙排列所组成的精密结构，使得釉质成为人体中最硬的钙化组织。根据不同的

遵义医科大学硕士学位论文张鹏14pMD18-T载体、pET-28a(+)载体及大肠杆菌DH5α由生工生物工程（上海）有限公司提供，并保存于本实验室。图2-1pMD18-T载体结构示意图图2-2pET-28a(+)载体结构示意图

【参考文献】：
期刊论文
[1]Enamel biomimetics—fiction or future of dentistry?[J]. Mirali Pandya,Thomas G.H.Diekwisch.  International Journal of Oral Science. 2019(01)
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[3]通过自生长方式实现壳聚糖—胶原聚合物引导的牙体硬组织仿生再矿化[J]. 任迅,姚静,杜芹,廖楚航,田鲲.  华西口腔医学杂志. 2014(05)
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[5]人牙釉质分级结构的观察[J]. 葛俊,崔福斋,吉宁,阎建新.  牙体牙髓牙周病学杂志. 2006(02)

博士论文
[1]蛋白调控骨、牙矿化的研究及模拟[D]. 程振江.清华大学 2010
[2]牙釉质表面的功能化及其仿生矿化的应用基础研究[D]. 王志伟.暨南大学 2008

硕士论文
[1]釉成熟蛋白的表达和矿化能力的研究[D]. 冯小云.电子科技大学 2017



本文编号：3371342