miR-4458在人肝细胞癌侵袭迁移中的作用及机制研究
发布时间：2021-09-03 13:42
目的:研究miR-4458在人肝细胞癌侵袭迁移中的作用及机制。方法:（1）通过qRT-PCR技术检测23对肝细胞癌及配对癌旁组织中miR-4458的表达情况,利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析miR-4458表达水平对肝细胞癌患者总体生存率的影响。（2）调控miR-4458在人肝细胞癌细胞系Hep3B和Huh7中的表达水平。通过划痕实验、Transwell实验验证miR-4458对肝细胞癌细胞侵袭迁移能力的影响,并通过Western blot检测上皮间质转化相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达变化。（3）使用qRT-PCR以及Western blot等方法检测miR-4458对靶基因及通路分子的影响。结果:（1）相较于配对癌旁组织,miR-4458在肝细胞癌组织中的表达明显下降,低表达miR-4458提示患者生存预期较差。（2）在肝细胞癌细胞中过表达miR-4458可抑制细胞的侵袭、迁移和上皮间质转化,去表达miR-4458可促进肝细胞癌细胞的恶性表型。（3）miR-4458能抑制TGFBR1的表达,并通过抑制TGF...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-4458在肝细胞组织和细胞系中的表达Figure1.TheexpressionofmiR-4458inHCCtissuesandcelllines
重庆医科大学硕士研究生学位论文17（*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001）(A)TheexpressionofmiR-4458in23pairedHCCtissues.(B)TheexpressionofmiR-4458inLO2cellsandHCCcelllines.(C)ThesurvivalrateofHCCpatientswashigherinthehighmiR-4458levelgroupthaninthelowmiR-4458levelgroup.(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)2.2miR-4458抑制肝细胞癌细胞的侵袭迁移我们通过划痕实验和transwell实验来评估miR-4458对肝细胞癌细胞系侵袭迁移能力的影响。在划痕实验中，转染了miR-4458mimics的Hep3B细胞细胞迁移的距离较对照组明显缩短（图2A），而转染miR-4458inhibitor的Huh7细胞细胞迁移距离较对照组明显增加（图2C）。在transwell实验中，转染了miR-4458mimics的Hep3B细胞下层小室跨膜细胞数量明显下降（图2B），而转染miR-4458inhibitor的Huh7细胞下层小室跨膜细胞数量明显增多（图2D）。图2.miR-4458调控肝细胞癌迁移和侵袭Figure2.miR-4458regulatesHCCcellmigrationandinvasion(A,B)使用划痕实验和transwell实验检测过表达miR-4445的Hep3B细胞迁移和侵袭能力。(C,D)使用划痕实验和transwell实验检测去表达miR-4458的Huh7细胞迁移和侵袭能力。
重庆医科大学硕士研究生学位论文19图3.miR-4458抑制肝细胞癌细胞上皮间质转化Figure3.miR-4458inhibitstheEMTofHCCcells(A,C)通过Westernblot和细胞免疫荧光检测Hep3B细胞中EMT标志蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达。(B,D)通过Westernblot和细胞免疫荧光检测Huh7细胞中EMT标志蛋白的表达。(A,C)ProteinlevelsoftheEMTmarkersE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailweredetectedinHep3Bcellsbywesternblotandimmunofluorescenceassay.(B,D)Huh7cellsweretransfectedwithNCinhibitorormiR-4458inhibitor,andE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailproteinlevelsweredetectedbywesternblotandimmunofluorescenceassay.2.4miR-4458靶向抑制TGFBR1的表达我们通过4个公共数据库miRDB、TargetScan、miRWalk和DIANATOOLS预测出TGFBR1是miR-4458的潜在靶基因（图4A）。双荧光素酶实验显示miR-4458mimics可以降低野生型TGFBR1-3’UTR的荧光信号，但不能改变突变型TGFBR1-3’UTR的荧光信号（图4B）。说明miR-4458可以与TGFBR1-3’UTR靶
本文编号：3381218
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-4458在肝细胞组织和细胞系中的表达Figure1.TheexpressionofmiR-4458inHCCtissuesandcelllines
重庆医科大学硕士研究生学位论文17（*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001）(A)TheexpressionofmiR-4458in23pairedHCCtissues.(B)TheexpressionofmiR-4458inLO2cellsandHCCcelllines.(C)ThesurvivalrateofHCCpatientswashigherinthehighmiR-4458levelgroupthaninthelowmiR-4458levelgroup.(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)2.2miR-4458抑制肝细胞癌细胞的侵袭迁移我们通过划痕实验和transwell实验来评估miR-4458对肝细胞癌细胞系侵袭迁移能力的影响。在划痕实验中，转染了miR-4458mimics的Hep3B细胞细胞迁移的距离较对照组明显缩短（图2A），而转染miR-4458inhibitor的Huh7细胞细胞迁移距离较对照组明显增加（图2C）。在transwell实验中，转染了miR-4458mimics的Hep3B细胞下层小室跨膜细胞数量明显下降（图2B），而转染miR-4458inhibitor的Huh7细胞下层小室跨膜细胞数量明显增多（图2D）。图2.miR-4458调控肝细胞癌迁移和侵袭Figure2.miR-4458regulatesHCCcellmigrationandinvasion(A,B)使用划痕实验和transwell实验检测过表达miR-4445的Hep3B细胞迁移和侵袭能力。(C,D)使用划痕实验和transwell实验检测去表达miR-4458的Huh7细胞迁移和侵袭能力。
重庆医科大学硕士研究生学位论文19图3.miR-4458抑制肝细胞癌细胞上皮间质转化Figure3.miR-4458inhibitstheEMTofHCCcells(A,C)通过Westernblot和细胞免疫荧光检测Hep3B细胞中EMT标志蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达。(B,D)通过Westernblot和细胞免疫荧光检测Huh7细胞中EMT标志蛋白的表达。(A,C)ProteinlevelsoftheEMTmarkersE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailweredetectedinHep3Bcellsbywesternblotandimmunofluorescenceassay.(B,D)Huh7cellsweretransfectedwithNCinhibitorormiR-4458inhibitor,andE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailproteinlevelsweredetectedbywesternblotandimmunofluorescenceassay.2.4miR-4458靶向抑制TGFBR1的表达我们通过4个公共数据库miRDB、TargetScan、miRWalk和DIANATOOLS预测出TGFBR1是miR-4458的潜在靶基因（图4A）。双荧光素酶实验显示miR-4458mimics可以降低野生型TGFBR1-3’UTR的荧光信号，但不能改变突变型TGFBR1-3’UTR的荧光信号（图4B）。说明miR-4458可以与TGFBR1-3’UTR靶
本文编号：3381218
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