人脐带间充质干细胞防治肾纤维化的作用及机制研究
发布时间：2021-09-18 09:07
目的:研究人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cell,HucMSC）对马兜铃酸（aristolochic acid,AA）诱导小鼠肾纤维化的干预作用,并初步探讨其中的作用机制。方法:体内实验:将成年C57BL/6雄性小鼠随机分为5组,分别为:正常对照组（腹腔注射PBS）、MSC对照组（腹腔注射PBS,尾静脉注射MSC）、AA暴露组（腹腔注射AA）、MSC+AA组（尾静脉注射MSC后,腹腔注射AA）及AA+MSC组（腹腔注射AA完成后,尾静脉注射MSC）。AA剂量为5mg/kg,隔天注射,共注射7次,MSC注射数目为1×106。注射完成后第4周麻醉并处死,收集血清及肾脏标本。检测肾功能及肾脏组织形态学改变,Western Blot和免疫组化法检测上皮间质转化指标及TGF-β/Smad信号通路指标的表达。体外实验:人肾小管上皮细胞HK-2随机分为4组,分别为正常对照组、MSC对照组、TGF组及TGF+MSC组,TGF-β1细胞因子剂量为5ng/ml,HK-2细胞和MSC细胞采用transwell小室共培养,...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组小鼠血肌酐及尿素氮统计图（A）血肌酐（B）尿素氮
重庆医科大学硕士研究生学位论文21MSC+AA组和AA+MSC组炎症细胞浸润程度明显减轻,肾小管损害较为改善,较Control组仍可见部分炎症浸润及肾小管扩张。Masson染色显示,Control组和MSC组肾脏形态结构未见明显异常,无明显胶原纤维沉积;AA组可见肾脏形态结构破坏,间质区域可见大量胶原纤维沉积;与AA组相比,加入MSC干预的两组可见间质区域胶原纤维沉积明显减少(图1.2),但较Control组仍有部分胶原纤维沉积。图1.2各组小鼠肾脏形态学染色结果从上至下分别为HE染色、PAS染色和Masson染色（标尺：50μm）Figure.1.2Histomorphologyofthekidneyineachgroup.Toprow:HEstainingofkidney,middlerow:PASstainingofkidney,bottomrow:Masson"strichromestainingofkidney(Scalebar:50μm)2.3MSC在肾脏内定位通过人细胞核特异性抗体MAB1281免疫组化染色，可以对通过尾静脉注射MSC到达肾脏情况进行检测（图1.3）。研究发现，Control组中无阳性表达，MSC组、MSC+AA组及AA+MSC组中可见MSC存在，其中MSC组MAB1281表达较少，而MSC+AA组和AA+MSC组中MAB1281表达量较MSC组明显增多。
重庆医科大学硕士研究生学位论文22图1.3MAB1281免疫组化结果，MSC在肾脏内定位。上图：(标尺:100μm)下图：(标尺:50μm)Figure.1.3ExpressionofMAB1281,andthelocationofHucMSCsinkidneytissuedetectedbyImmunohistochemicalstaining.Thesmallbluesquaresinupperimages(scalebar:100μm)aremagnifiedtotheimagesbelow(scalebar:50μm)ineachgroup3讨论近年来有文献报道，部分中草药其中的成分马兜铃酸（AA）的摄入可能引发马兜铃酸肾病，患者表现为进行性的间质性肾炎，出现肾功能持续恶化伴有肾脏瘢痕形成，最终可能会进展成为终末期肾病[1]。于是有学者利用AA成功构建小鼠肾纤维化模型，并发现该动物模型小鼠肾脏病理特征与慢性肾病患者类似，表现为肾小管-间质的广泛纤维化伴萎缩[2-4]。相较于传统单侧输尿管梗阻（UUO）的慢性肾病造模方式，这种方法造模方式难度较小，可以作为间质纤维化的一般模型。此外，还可以有效排除UUO模型中的另一侧肾脏代偿，对肾功能进行更准确的测量，贴近于临床病例研究。因此，在本实验中，我们选用AA来构建小鼠慢性肾病肾纤维化模型，并分别在AA注射前后用HucMSC进行干预，来验证其预防和治疗作用。本部分研究中，AA暴露引起小鼠血肌酐和尿素氮水平的升高，提示小鼠的肾功能受损；HE和PAS染色结果提示小鼠肾脏结构破坏，炎症细胞聚集，呈现病理变化；Masson染色中，可以发现大量胶原纤维沉积在肾脏间质区域，引起肾脏纤维化改变。为分别观察HucMSC对AA诱导纤维化的预防和治疗作用，在AA暴
本文编号：3399865
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组小鼠血肌酐及尿素氮统计图（A）血肌酐（B）尿素氮
重庆医科大学硕士研究生学位论文21MSC+AA组和AA+MSC组炎症细胞浸润程度明显减轻,肾小管损害较为改善,较Control组仍可见部分炎症浸润及肾小管扩张。Masson染色显示,Control组和MSC组肾脏形态结构未见明显异常,无明显胶原纤维沉积;AA组可见肾脏形态结构破坏,间质区域可见大量胶原纤维沉积;与AA组相比,加入MSC干预的两组可见间质区域胶原纤维沉积明显减少(图1.2),但较Control组仍有部分胶原纤维沉积。图1.2各组小鼠肾脏形态学染色结果从上至下分别为HE染色、PAS染色和Masson染色（标尺：50μm）Figure.1.2Histomorphologyofthekidneyineachgroup.Toprow:HEstainingofkidney,middlerow:PASstainingofkidney,bottomrow:Masson"strichromestainingofkidney(Scalebar:50μm)2.3MSC在肾脏内定位通过人细胞核特异性抗体MAB1281免疫组化染色，可以对通过尾静脉注射MSC到达肾脏情况进行检测（图1.3）。研究发现，Control组中无阳性表达，MSC组、MSC+AA组及AA+MSC组中可见MSC存在，其中MSC组MAB1281表达较少，而MSC+AA组和AA+MSC组中MAB1281表达量较MSC组明显增多。
重庆医科大学硕士研究生学位论文22图1.3MAB1281免疫组化结果，MSC在肾脏内定位。上图：(标尺:100μm)下图：(标尺:50μm)Figure.1.3ExpressionofMAB1281,andthelocationofHucMSCsinkidneytissuedetectedbyImmunohistochemicalstaining.Thesmallbluesquaresinupperimages(scalebar:100μm)aremagnifiedtotheimagesbelow(scalebar:50μm)ineachgroup3讨论近年来有文献报道，部分中草药其中的成分马兜铃酸（AA）的摄入可能引发马兜铃酸肾病，患者表现为进行性的间质性肾炎，出现肾功能持续恶化伴有肾脏瘢痕形成，最终可能会进展成为终末期肾病[1]。于是有学者利用AA成功构建小鼠肾纤维化模型，并发现该动物模型小鼠肾脏病理特征与慢性肾病患者类似，表现为肾小管-间质的广泛纤维化伴萎缩[2-4]。相较于传统单侧输尿管梗阻（UUO）的慢性肾病造模方式，这种方法造模方式难度较小，可以作为间质纤维化的一般模型。此外，还可以有效排除UUO模型中的另一侧肾脏代偿，对肾功能进行更准确的测量，贴近于临床病例研究。因此，在本实验中，我们选用AA来构建小鼠慢性肾病肾纤维化模型，并分别在AA注射前后用HucMSC进行干预，来验证其预防和治疗作用。本部分研究中，AA暴露引起小鼠血肌酐和尿素氮水平的升高，提示小鼠的肾功能受损；HE和PAS染色结果提示小鼠肾脏结构破坏，炎症细胞聚集，呈现病理变化；Masson染色中，可以发现大量胶原纤维沉积在肾脏间质区域，引起肾脏纤维化改变。为分别观察HucMSC对AA诱导纤维化的预防和治疗作用，在AA暴
本文编号：3399865
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