TRPM4通道对人口腔颊黏膜成纤维细胞增殖和迁移的影响

发布时间：2021-09-25 07:40

　　目的:验证TRPM4（transient receptor potential melastatin-4）在口腔颊黏膜成纤维细胞的表达,探讨其对人口腔颊黏膜成纤维细胞迁移与增殖中的作用。方法:收集人正常颊黏膜组织进行原代细胞提取与原代培养;采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测成纤维细胞中TRPM4的表达。全细胞膜片钳记录成纤维细胞TRPM4通道的全细胞电流。MTT法和细胞划痕实验分别检测应用TRPM4通道特异性阻断剂（9-菲酚）或特异性siRNA抑制TRPM4通道的功能对成纤维细胞增殖和迁移的影响。结果:人口腔颊黏膜成纤维细胞功能性表达TRPM4。抑制TRPM4通道的功能能够明显降低成纤维细胞的增殖和迁移能力。结论:TRPM4通道参与成纤维细胞增殖以及迁移能力的调控。 

【文章来源】：口腔医学研究. 2020,36(05)北大核心

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【部分图文】：

颊黏膜成纤维细胞的原代培养(×40)

TRPM4特异FAM-siRNA转染细胞24 h后,倒置荧光显微镜下可见细胞发出绿色荧光(图5a)。RT-PCR结果显示成纤维细胞中TRPM4无表达(图5b)。膜片钳实验结果表明,在细胞内液1 μmol/L钙离子浓度条件下,与对照组相比较,TRPM4的全细胞电流明显减弱(图5c)。MTT结果显示:加入100 μmol/L 9-菲酚或者将TRPM4进行基因沉默24 h后,能够抑制成纤维细胞的增殖能力,9-菲酚组的细胞生长抑制率为13.76%,siRNA转染组的细胞增殖率为16.03%(P<0.05)。细胞划痕实验表明,9-菲酚处理组以及TRPM4 基因沉默组细胞在第24小时的细胞迁移速度明显低于对照组细胞(图6)。图3 免疫荧光,RT-PCR 鉴定TRPM4在颊黏膜成纤维细胞的表达(×200)

免疫荧光,RT-PCR 鉴定TRPM4在颊黏膜成纤维细胞的表达(×200)


本文编号：3409359