糖基化脂肪来源干细胞促进SD大鼠单穿支皮瓣神经再生的实验研究

发布时间：2021-09-28 02:06

　　目的:探讨糖基化脂肪来源干细胞对SD大鼠单穿支皮瓣神经再生的作用及可能机制,为促进临床皮瓣感觉恢复提供前期研究基础。方法:1.经患者知情同意并通过遵义医科大学伦理委员会批准后,从遵义医科大学烧伤整形外科正常人抽脂手术中获取皮下脂肪组织,利用Ⅰ型胶原酶消化机械离心分离,从正常人皮下脂肪中提取脂肪来源干细胞（ASCs）,用含10%胎牛血清（FBS）+1%双抗的低糖DMEM（1g/L）培养基,在37℃、5%CO2恒温孵箱中进行培养,利用0.25%胰酶消化传代。2.取P3 nASCs进行鉴定,流式细胞仪检测细胞表面标志物CD105、CD90、CD73、CD45、CD44、CD34、CD11b、CD19及HLA-DR的表达情况。行成脂、成骨、成软骨诱导分化实验,分别用油红“O”、茜素红、阿利辛蓝染色鉴定成脂、成骨、成软骨诱导分化效果。3.取P3 nASCs,用含0.2%晚期糖基化终产物（AGES）、15%FBS+1%双抗的高糖DMEM（4.5g/L）的糖基化诱导培养基,在37℃、5%CO2恒温孵箱中进行培养,2-3天换液一次,连续诱导21天获得糖基化脂肪来源干细胞（gASCs）。4.分别收集nA... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠腹部设计3cmx2cm岛状；B：皮瓣切取后剔除单穿支血管周围多余神经结缔

遵义医科大学硕士学位论文郑咏舰202结果2.1nASCs和gASCs的培养成功从正常人脂肪组织中分离nASCs，原代细胞生长速度较慢，在提取12h后可见少量细胞贴壁生长，呈多边形或长梭形，48h更换完全培养基后细胞生长速度加快，8-10d融合可达80%，传代后细胞生长速度明显增快，5-7天后可再次传代，传至P3代后，取nASCs开始糖基化诱导培养，随着诱导时间延长，gASCs较nASCs增殖速度减慢，需7-9天才能进一步传代，而nASCs仍保持5-7天可再次传代，形态上gASCs形态与nASCs差异不明显，排列两者均呈放射样漩涡状生长。（如图2）nASCsgASCs图2P3代nASCs与gASCs细胞形态均呈长梭形，放射状漩涡状生长（x40）2.2nASCs的表型鉴定取培养传代至P3代的nASCs，利用流式细胞仪检测细胞表面标志物，结果表明：CD44(98.5%)、CD73(99.96%)、CD90(97.09%)、CD105(98.00%)表达呈阳性，CD45/CD34/CD11b/CD19/HLA-DR(1.56%)表达呈阴性。（如图3）

CD44(98.5%)、CD73(99.96%)、CD90(97.09%)、CD105(98.00%)，呈阳性表达，


本文编号：3411037