广泛耐药高毒力肺炎克雷伯菌XJ-K1与XJ-K2全基因组测序分析及5种中药单体对其抗菌活性的研究初探
发布时间：2021-10-16 03:39
目的:分析临床分离肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2的耐药特征、毒力特征、全基因组序列和克隆分型。比较5种中药单体对菌株XJ-K1和XJ-K2的体外抗菌活性,并分析抗菌活性较好的中药单体与抗生素联合用药效果。为临床进一步了解肺炎克雷伯菌特性,及正确使用抗生素和控制医院感染提供科学依据,同时也为寻找新的治疗方案提供思路。方法:1.收集复旦大学附属华山医院北院分离的肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2,采用微量肉汤稀释法测定26种抗菌药物对其的最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration,MIC）。2.采用拉丝实验（String test）判定菌株XJ-K1和XJ-K2的高粘液表型。3.采用PCR（Polymerase chain reaction）)对菌株XJ-K1和XJ-K2进行耐药基因和毒力基因扩增。4.采用多位点序列分型技术（Multilocus sequence typing,MLST）分析菌株XJ-K1和XJ-K2的ST型别。5.采用Illumina HiSeq 4000平台和PacBio RSII平台对菌株XJ-K1和XJ-K2进行全基因组测序...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K216SrRNA基因扩增结果
遵义医科大学硕士学位论文朱小奎252.4菌株XJ-K1和XJ-K2耐药基因检测结果为了解菌株XJ-K1和XJ-K2的耐药机制，本研究通过PCR的方法扩增31个肺炎克雷伯菌相关耐药基因。结果显示，耐药基因blaTEM-1、blaKPC、blaSHV、rmtB在菌株XJ-K1和XJ-K2均检出；而耐药基因qnrS和tet(A)仅在菌株XJ-K2中被检出。在两菌株的染色体上均发现gyrA基因83位（Ser83Ile）和87位氨基酸（Asp87Gly）的突变，以及在parC基因80位氨基酸（Ser80Ile）的突变；这些基因已知的点突变与肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物耐药相关[46]。耐药基因电泳结果见图1-2。图1-2肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2耐药基因扩增结果2.5菌株XJ-K1和XJ-K2毒力因子检测结果为了解菌株XJ-K1和XJ-K2是否存在高毒力相关基因，本研究通过PCR扩增11个毒力基因。结果表明，菌株XJ-K1和XJ-K2均携带着高毒力相关基因iucABCD、iutA、rmpA和rmpA2,仅在菌株XJ-K2中检测到iroN基因。毒力基因电泳结果见图1-3。
遵义医科大学硕士学位论文朱小奎26图1-3肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2毒力基因扩增结果结合拉丝实验结果以及高毒力相关毒力基因检测结果，判定菌株XJ-K1和XJ-K2为高毒力肺炎克雷伯菌[47]。2.6MLST分型结果为了解菌株XJ-K1与XJ-K2之间同源性，本研究通过PCR扩增肺炎克雷伯菌7个管家基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴定后（图1-4）进行测序，测序结果在肺炎克雷伯菌MLST数据库（https://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.htm）比对。结果显示，肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2均为ST11，是中国地区CRKP最主要的ST型[48]。其等位基因gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB和tonB编号为（3-3-1-1-1-1-4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]药物外排泵对肺炎克雷伯菌耐药性影响的研究进展[J]. 晏国威,向延根,马小华,潘建华,喻容,石国民. 中国卫生检验杂志. 2019(21)
[2]中药单体与抗菌药物联合应用对抗泛耐药鲍曼不动杆菌的作用[J]. 彭勤,王清会,孟千琳,凌保东. 中国药理学与毒理学杂志. 2019(09)
[3]肺炎克雷伯菌毒力影响因素和耐药机制研究进展[J]. 丰雯诗,王逸群,陈旭岩. 北京医学. 2019(07)
[4]碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药与传播机制研究进展及对策[J]. 蒋晓飞,周迎. 诊断学理论与实践. 2018(06)
[5]耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制的研究进展[J]. 许晓娜,王志盛,张小倩,刘心伟,郭孝兰,李永伟. 河南医学研究. 2018(17)
[6]苦参碱类生物碱抗菌药理作用的研究进展[J]. 张明发,沈雅琴. 抗感染药学. 2018(03)
[7]肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类的耐药机制与危险因素[J]. 杨柳,张智洁,秦晓松. 中国抗生素杂志. 2018 (02)
[8]秦皮乙素对产KPC碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的体外抗菌效果[J]. 王蕾,刘志远,潘健,张婷菊,齐杰,张国军. 检验医学与临床. 2017(23)
[9]中药有效成分与氨基糖苷类药物体外联合抑菌作用的研究[J]. 张迎冰,徐光科,黄立,刘纪成,刘锦妮,易本驰,吴海港. 黑龙江畜牧兽医. 2017(23)
[10]木犀草素对4种细菌体外抗菌活性研究[J]. 黄程程,高翔,孙婷婷,于立辉,郭洋,宏伟,张德显,刘明春. 中国兽医学报. 2017(08)
本文编号：3439073
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K216SrRNA基因扩增结果
遵义医科大学硕士学位论文朱小奎252.4菌株XJ-K1和XJ-K2耐药基因检测结果为了解菌株XJ-K1和XJ-K2的耐药机制，本研究通过PCR的方法扩增31个肺炎克雷伯菌相关耐药基因。结果显示，耐药基因blaTEM-1、blaKPC、blaSHV、rmtB在菌株XJ-K1和XJ-K2均检出；而耐药基因qnrS和tet(A)仅在菌株XJ-K2中被检出。在两菌株的染色体上均发现gyrA基因83位（Ser83Ile）和87位氨基酸（Asp87Gly）的突变，以及在parC基因80位氨基酸（Ser80Ile）的突变；这些基因已知的点突变与肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物耐药相关[46]。耐药基因电泳结果见图1-2。图1-2肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2耐药基因扩增结果2.5菌株XJ-K1和XJ-K2毒力因子检测结果为了解菌株XJ-K1和XJ-K2是否存在高毒力相关基因，本研究通过PCR扩增11个毒力基因。结果表明，菌株XJ-K1和XJ-K2均携带着高毒力相关基因iucABCD、iutA、rmpA和rmpA2,仅在菌株XJ-K2中检测到iroN基因。毒力基因电泳结果见图1-3。
遵义医科大学硕士学位论文朱小奎26图1-3肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2毒力基因扩增结果结合拉丝实验结果以及高毒力相关毒力基因检测结果，判定菌株XJ-K1和XJ-K2为高毒力肺炎克雷伯菌[47]。2.6MLST分型结果为了解菌株XJ-K1与XJ-K2之间同源性，本研究通过PCR扩增肺炎克雷伯菌7个管家基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴定后（图1-4）进行测序，测序结果在肺炎克雷伯菌MLST数据库（https://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.htm）比对。结果显示，肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2均为ST11，是中国地区CRKP最主要的ST型[48]。其等位基因gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB和tonB编号为（3-3-1-1-1-1-4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]药物外排泵对肺炎克雷伯菌耐药性影响的研究进展[J]. 晏国威,向延根,马小华,潘建华,喻容,石国民. 中国卫生检验杂志. 2019(21)
[2]中药单体与抗菌药物联合应用对抗泛耐药鲍曼不动杆菌的作用[J]. 彭勤,王清会,孟千琳,凌保东. 中国药理学与毒理学杂志. 2019(09)
[3]肺炎克雷伯菌毒力影响因素和耐药机制研究进展[J]. 丰雯诗,王逸群,陈旭岩. 北京医学. 2019(07)
[4]碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药与传播机制研究进展及对策[J]. 蒋晓飞,周迎. 诊断学理论与实践. 2018(06)
[5]耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制的研究进展[J]. 许晓娜,王志盛,张小倩,刘心伟,郭孝兰,李永伟. 河南医学研究. 2018(17)
[6]苦参碱类生物碱抗菌药理作用的研究进展[J]. 张明发,沈雅琴. 抗感染药学. 2018(03)
[7]肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类的耐药机制与危险因素[J]. 杨柳,张智洁,秦晓松. 中国抗生素杂志. 2018 (02)
[8]秦皮乙素对产KPC碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的体外抗菌效果[J]. 王蕾,刘志远,潘健,张婷菊,齐杰,张国军. 检验医学与临床. 2017(23)
[9]中药有效成分与氨基糖苷类药物体外联合抑菌作用的研究[J]. 张迎冰,徐光科,黄立,刘纪成,刘锦妮,易本驰,吴海港. 黑龙江畜牧兽医. 2017(23)
[10]木犀草素对4种细菌体外抗菌活性研究[J]. 黄程程,高翔,孙婷婷,于立辉,郭洋,宏伟,张德显,刘明春. 中国兽医学报. 2017(08)
本文编号：3439073
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