亲环素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调节RAW264.7细胞自噬

发布时间：2021-10-16 05:05

　　目的检测亲环素A（cyclophilin A,Cy PA）是否通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）信号通路调控RAW264.7细胞自噬水平。方法体外培养RAW264.7细胞,分为空白对照组、Cy PA组（1 ng/m L,10ng/m L,100 ng/m L,500 ng/m L,1000 ng/m L）以明确Cy PA的最适浓度,培养24h后蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测自噬相关蛋白LC3的表达;分空白对照组、Cy PA组（100 ng/m L）,加入Cy PA后继续培养6h观察Cy PA对各信号通路的影响,Western Blot检测LC3,p-ERK,p-P38,p-JNK,p-PI3K,p-Akt,p-m TOR等蛋白的表达;分空白对照组、Cy PA组、LY294002组、Cy PA+LY294002组观察PI3K/Akt/m TOR信号通路中各蛋白表达的变化,Western Blot检测LC3,p-PI3K,p-Akt,p-m TOR等蛋白的表达。分别用免疫荧光显微镜、电镜观察RAW264.7细胞自... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1.研究背景
    1.2.本研究的目的、内容
第二章 亲环素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调节RAW264.7细胞自噬水平
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂及耗材
        2.1.3 缓冲液及其他溶液
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 分组及细胞处理
        2.2.3 细胞蛋白提取及Western Blot
        2.2.4 GFP-RFP-LC3腺病毒感染，自噬小体的检测
        2.2.5 电镜观察
        2.2.6 统计学方法
    2.3 结果
        2.3.1 CyPA对RAW264.7 细胞自噬的影响呈时间和浓度依赖性
        2.3.2 CyPA处理的RAW264.7 细胞自噬小体形成增多
        2.3.3 CyPA对PI3K/Akt/mTOR，p-ERK，p-P38，p-JNK等信号通路的影响
        2.3.4 加入特异性的PI3K抑制剂LY294002对p-PI3K，p-Akt，p-mTOR蛋白表达的影响
    2.4 讨论
第三章 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3439204