人骨髓间充质干细胞来源的外泌体通过传递miR-199a-3p抵抗肾缺血再灌注损伤

发布时间：2021-11-01 05:25

　　背景:缺血再灌注损伤（Ischemia/reperfusion injury,IRI）是引起急性肾损伤的主要原因。近年来的研究发现骨髓间充质干细胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）在心肌、脑、肾的缺血再灌注损伤中起保护性作用,并且证实这种保护性作用是由BMSCs旁分泌的外泌体所介导。外泌体是一种直径为40-200nm的细胞外囊泡,能够选择性地包裹多种生物活性物质,其中包括microRNA（miRNA）。最近的研究发现人骨髓间充质干细胞来源的外泌体（Exosomes secreted from human-bone-marrow-derived mesenchymal stem cells,hBMSC-Exos）中富含miR-199a-3p,并且有研究报道miR-199a-3p在IRI过程中起着重要的调控作用,但其在肾IRI中的作用却未见报道。目的:探究hBMSC-Exos在肾IRI中的保护性作用,明确外泌体中的miR-199a-3p在该过程中的重要作用并阐明其可能的调控机制。方法:采用超速离心法提取hBMSC-Exos,... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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hBMSC-Exos的鉴定（A）透射电子显微镜（B）纳米颗粒追踪分析（C）WesternblotFigure1.1IdentificationofhBMSC-Exos.(A)MorphologyofhBMSC-Exoswasdetectedby

hBMSC-Exos的摄取（A）HK-2细胞对hBMSC-Exos的摄取（B）肾脏组织对hBMSC-Exos的摄取Figure1.2InternalizationofhBMSC-Exos.(A)hBMSC-ExosweremarkedwiththegreenfluorescentdyePKH67andcytoskeletonandnucleiofHK-2cellswerestainedwithActinRedandDAPI.Laserscanningconfocalmicroscopewasusedtoobserve.Scalebar=10μm(original

重庆医科大学硕士研究生学位论文25同时，我们还检测了几种凋亡相关蛋白，Westernblot的结果表明，HK-2接受OGD/R处理后促凋亡蛋白Cleavedcaspase-3和Bax的表达水平显著上升，而抗凋亡蛋白Bcl-2的水平明显下降，但在接受hBMSCs共培养或hBMSC-Exos处理后能逆转这样的蛋白表达变化。此外，我们还发现在non-exoCM组的抗凋亡效果明显弱于hBMSCs共培养和hBMSC-Exos处理组，这意味着hBMSCs的保护性作用是由其分泌的外泌体所介导。综上所述，hBMSC-Exos能抑制H/R引起的HK-2细胞凋亡，从而起着保护性作用。（图1.3）图1.3hBMSC-Exos通过抑制HK-2细胞凋亡在H/R中起保护性作用（A）hBMSC-Exos抑制细胞凋亡（B）统计分析（C）hBMSC-Exos调控凋亡相关蛋白的表达Figure1.3hBMSC-ExoskeepHK-2cellsfromH/Rinjurybysuppressingapoptosis.(A)HK-2cellswerecoculturedwithhBMSCsortreatedwithnon-exoCMorhBMSC-ExosandthenexposedtoOGD/Rtreatment.TheapoptoticproportionofHK-2cellswasdetectedbyflowcytometry.(B)Thestatisticalgraphofcellapoptosis(n=3)(*p<0.05hBMSCsversusnon-hBMSCs,hBMSC-Exosversusnon-hBMSCs,hBMSC-Exosversusnon-exoCM,**p<0.01non-hBMSCsversuscontrol).(C)HK-2cellscoculturedwithhBMSCsortreatedwithnon-exoCMorhBMSC-ExosandthensubjectedtoOGD/Rtreatment.Then,thewholeproteinswereextractedandpreparedtodetectCleavedcaspase-3,Bax,andBcl-2expressionbywesternblotting.


本文编号：3469583