雌激素对小鼠C 2 C 12 成肌细胞氧化损伤的保护作用研究
发布时间：2021-11-01 19:18
研究目的:研究证明在骨骼肌损伤模型的各个阶段,都有一些产生自由基的潜在位点,即氧自由基产生导致的氧化应激在骨骼肌损伤和修复的整个过程中,都是一个重要的因素。雌激素由于其抗氧化结构特性,是否能在骨骼肌损伤和修复过程中发挥其抗氧化作用,从而保护和预防肌肉免受损伤和炎症,目前国内外研究较少,因此本研究在建立过氧化氢诱导的小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤的基础上,探讨雌激素补充对骨骼肌细胞氧化损伤的保护作用,并探讨相关的机制,为雌激素治疗和预防骨骼肌损伤提供细胞水平的实验依据。研究方法:本实验以小鼠C2C12成肌细胞为研究对象,建立过氧化氢诱导的细胞氧化应激模型,细胞传代培养达到80%融合后,更换无血清培养基进行分组并设置复孔,实验分为对照组（C组,空白对照组）、雌激素组（E组,用1μmol/L的17β-雌二醇预处理1小时）、过氧化氢组（H组,加入1mmol/L过氧化氢）、雌激素过氧化氢组（EH组,用1μmol/L的17β-雌二醇预处理1小时后加入1mmol/L过氧化氢）。干预结束后分别检测培养液中乳酸脱氢酶...
【文章来源】：上海体育学院上海市
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Keap1/Nrf2/ARE信号通路鉴于目前对雌激素在骨骼肌损伤与修复方面的研究主要集中在动物和人体实验，相关细胞水平的离体实验研究较少，并且分子机制方面主要集中在雌激素
∈?EH)，并设置空白对照组(C)。A:细胞培养液中LDH活性。**P<0.001,与C组相比；##P<0.001,与H组相比。B:细胞毒性。**P<0.001,与C组相比；##P<0.001,与H组相比。图2雌激素对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤细胞毒性的影响4.2雌激素对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤后细胞内活性氧(ROS)生成的影响因为H2O2的毒性是通过活性氧(ROS)生成而介导的，因此本实验用DCF-DA法研究了雌激素是否阻断了H2O2诱导的氧化应激，增强了C2C12细胞的抗氧化防御系统。检测各组细胞的DCF产物相对荧光水平，结果显示(图3)，与对照组(C组)相比，雌激素组(E组)没有显著性差异(100%，116.67±17.51%，P=0.206)，过氧化氢组(H组，)显著增加(100%，606.67±21.60%，P<0.001)；与过氧化氢组相比，雌激素过氧化氢组(EH组)显著降低(606.67±21.60%，251.67±34.30%，P<0.001)。结果提示H2O2诱导了小鼠C2C12成肌细胞ROS生成的增加，雌激素显著降低了H2O2诱导的ROS生成，且在没有H2O2干预的情况下，雌激素对ROS的生成没有显著作用。小鼠C2C12成肌细胞分别用1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时(E)、1mmol/LH2O2作用24小时(H)、1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时后加入1mmol/LH2O2作用24小时(EH)，并设置空白对照组(C)。**P<0.001,与C组相比；##P<0.001,与H组相比。图3雌激素对细胞内活性氧(ROS)生成的影响4.3雌激素对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤后细胞活力的影响为了评价雌激素是否对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤后细胞活力有影响，本实验通过MTT法检测各组细胞吸光度值，并计算细胞相对活力(cellviability%)。吸光度结果显示(图4，A)，与对照组(C组)相比，雌激素组(E组)无显著差别(0.36±0.04，0.37±0.03，P=0.5
雌激素对小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤的保护作用研究24小鼠C2C12成肌细胞分别用1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时(E)、1mmol/LH2O2作用24小时(H)、1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时后加入1mmol/LH2O2作用24小时(EH)，并设置空白对照组(C)。A:细胞内Nrf2的表达。*P<0.01,与C组相比；#P<0.01,与H组相比。B:细胞内p-Nrf2蛋白的表达。*P<0.01,与C组相比；#P<0.01,与H组相比。C：细胞内HO-1的表达。*P<0.01,与C组相比；#P<0.01,与H组相比。图6雌激素对相关蛋白表达的影响5讨论研究证明，氧化应激是伴随着衰老、炎症、神经退行性疾并心血管疾病和肌肉骨骼损伤疾病等生理、病理状态发生的[2]。氧化应激超出生理适应能力时，自由基会造成细胞内糖脂代谢和蛋白质代谢的紊乱，攻击细胞膜以及细胞核造成核酸代谢紊乱，同时还会引起直接或间接ROS介导的脂质过氧化和蛋白质修饰，从而使细胞变性诱导细胞发生凋亡或坏死，进而导致骨骼肌损伤的发生以及修复的延迟等一系列负面影响。目前细胞水平的氧化应激实验普遍采用过氧化氢诱导细胞氧化损伤模型，YinghuiRen等[101]为验证具有有效的抗糖尿并抗动脉粥样硬化和抗炎特性的脂联素（APN）是否在骨骼肌中也具有抗氧化活性及其调节机(C)
【参考文献】：
期刊论文
[1]雌激素缺乏对痴呆小鼠学习记忆及海马区细胞增殖和成熟的影响[J]. 罗敏,赵月阳,杜烨湘,李彦臻,贺桂琼,汪克建. 中国细胞生物学学报. 2019(07)
[2]自噬与Nrf2信号通路之间联系的研究进展[J]. 刘丹,李昕. 中国细胞生物学学报. 2016(12)
[3]周期性机械牵张刺激对C2C12小鼠成肌细胞增殖和有氧代谢能力的影响[J]. 胡晓磐,达忱,黄东洋,田向阳,史仍飞. 医用生物力学. 2016(02)
[4]Keap1-Nrf2/ARE信号通路的抗氧化应激作用及其调控机制[J]. 胡流芳,王迎,任汝静,霍海如,孙建辉,李洪梅,朱亚英,谭余庆. 国际药学研究杂志. 2016(01)
[5]自由基相关细胞信号传导的研究进展[J]. 廖日滔,郭静科,李冰洁,饶平凡. 中国细胞生物学学报. 2014(11)
[6]SDF-1/CXCR4在BMP9介导C2C12细胞成骨分化过程中的作用研究[J]. 刘晨,杨丹丹,白慧丽,李宝林,何方,张汝益,严树涓,施琼. 中国细胞生物学学报. 2013(02)
[7]Nrf2/ARE信号通路及其调控的抗氧化蛋白[J]. 李航,段惠军. 中国药理学通报. 2011(03)
[8]脂氧素A4对脂多糖诱导巨噬细胞氧化损伤的影响[J]. 周晓燕,徐方云,蔡震宇,王红梅,祝子瑞,吴萍,叶笃筠. 细胞生物学杂志. 2009(03)
本文编号：3470656
【文章来源】：上海体育学院上海市
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Keap1/Nrf2/ARE信号通路鉴于目前对雌激素在骨骼肌损伤与修复方面的研究主要集中在动物和人体实验，相关细胞水平的离体实验研究较少，并且分子机制方面主要集中在雌激素
∈?EH)，并设置空白对照组(C)。A:细胞培养液中LDH活性。**P<0.001,与C组相比；##P<0.001,与H组相比。B:细胞毒性。**P<0.001,与C组相比；##P<0.001,与H组相比。图2雌激素对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤细胞毒性的影响4.2雌激素对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤后细胞内活性氧(ROS)生成的影响因为H2O2的毒性是通过活性氧(ROS)生成而介导的，因此本实验用DCF-DA法研究了雌激素是否阻断了H2O2诱导的氧化应激，增强了C2C12细胞的抗氧化防御系统。检测各组细胞的DCF产物相对荧光水平，结果显示(图3)，与对照组(C组)相比，雌激素组(E组)没有显著性差异(100%，116.67±17.51%，P=0.206)，过氧化氢组(H组，)显著增加(100%，606.67±21.60%，P<0.001)；与过氧化氢组相比，雌激素过氧化氢组(EH组)显著降低(606.67±21.60%，251.67±34.30%，P<0.001)。结果提示H2O2诱导了小鼠C2C12成肌细胞ROS生成的增加，雌激素显著降低了H2O2诱导的ROS生成，且在没有H2O2干预的情况下，雌激素对ROS的生成没有显著作用。小鼠C2C12成肌细胞分别用1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时(E)、1mmol/LH2O2作用24小时(H)、1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时后加入1mmol/LH2O2作用24小时(EH)，并设置空白对照组(C)。**P<0.001,与C组相比；##P<0.001,与H组相比。图3雌激素对细胞内活性氧(ROS)生成的影响4.3雌激素对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤后细胞活力的影响为了评价雌激素是否对H2O2诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤后细胞活力有影响，本实验通过MTT法检测各组细胞吸光度值，并计算细胞相对活力(cellviability%)。吸光度结果显示(图4，A)，与对照组(C组)相比，雌激素组(E组)无显著差别(0.36±0.04，0.37±0.03，P=0.5
雌激素对小鼠C2C12成肌细胞氧化损伤的保护作用研究24小鼠C2C12成肌细胞分别用1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时(E)、1mmol/LH2O2作用24小时(H)、1μmol/L17β-雌二醇预处理1小时后加入1mmol/LH2O2作用24小时(EH)，并设置空白对照组(C)。A:细胞内Nrf2的表达。*P<0.01,与C组相比；#P<0.01,与H组相比。B:细胞内p-Nrf2蛋白的表达。*P<0.01,与C组相比；#P<0.01,与H组相比。C：细胞内HO-1的表达。*P<0.01,与C组相比；#P<0.01,与H组相比。图6雌激素对相关蛋白表达的影响5讨论研究证明，氧化应激是伴随着衰老、炎症、神经退行性疾并心血管疾病和肌肉骨骼损伤疾病等生理、病理状态发生的[2]。氧化应激超出生理适应能力时，自由基会造成细胞内糖脂代谢和蛋白质代谢的紊乱，攻击细胞膜以及细胞核造成核酸代谢紊乱，同时还会引起直接或间接ROS介导的脂质过氧化和蛋白质修饰，从而使细胞变性诱导细胞发生凋亡或坏死，进而导致骨骼肌损伤的发生以及修复的延迟等一系列负面影响。目前细胞水平的氧化应激实验普遍采用过氧化氢诱导细胞氧化损伤模型，YinghuiRen等[101]为验证具有有效的抗糖尿并抗动脉粥样硬化和抗炎特性的脂联素（APN）是否在骨骼肌中也具有抗氧化活性及其调节机(C)
【参考文献】：
期刊论文
[1]雌激素缺乏对痴呆小鼠学习记忆及海马区细胞增殖和成熟的影响[J]. 罗敏,赵月阳,杜烨湘,李彦臻,贺桂琼,汪克建. 中国细胞生物学学报. 2019(07)
[2]自噬与Nrf2信号通路之间联系的研究进展[J]. 刘丹,李昕. 中国细胞生物学学报. 2016(12)
[3]周期性机械牵张刺激对C2C12小鼠成肌细胞增殖和有氧代谢能力的影响[J]. 胡晓磐,达忱,黄东洋,田向阳,史仍飞. 医用生物力学. 2016(02)
[4]Keap1-Nrf2/ARE信号通路的抗氧化应激作用及其调控机制[J]. 胡流芳,王迎,任汝静,霍海如,孙建辉,李洪梅,朱亚英,谭余庆. 国际药学研究杂志. 2016(01)
[5]自由基相关细胞信号传导的研究进展[J]. 廖日滔,郭静科,李冰洁,饶平凡. 中国细胞生物学学报. 2014(11)
[6]SDF-1/CXCR4在BMP9介导C2C12细胞成骨分化过程中的作用研究[J]. 刘晨,杨丹丹,白慧丽,李宝林,何方,张汝益,严树涓,施琼. 中国细胞生物学学报. 2013(02)
[7]Nrf2/ARE信号通路及其调控的抗氧化蛋白[J]. 李航,段惠军. 中国药理学通报. 2011(03)
[8]脂氧素A4对脂多糖诱导巨噬细胞氧化损伤的影响[J]. 周晓燕,徐方云,蔡震宇,王红梅,祝子瑞,吴萍,叶笃筠. 细胞生物学杂志. 2009(03)
本文编号：3470656
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