血管紧张素（1-7）通过PI3K/Akt/FoxO1通路对高糖诱导MIN6细胞去分化的作用及机理研究
发布时间：2021-11-04 14:35
背景与目的:过去认为β细胞功能障碍主要源于β细胞的过早凋亡,但最近研究发现去分化是造成β细胞功能障碍的重要机制之一,且去分化造成的β细胞改变是可逆的。近年来多个临床循证医学研究发现肾素-血管紧张素系统（RAS）阻断剂可降低糖尿病高危人群新发糖尿病发生率。申请者前期研究也发现RAS的主要效应物血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可通过诱导β细胞凋亡、胰岛局部炎症及氧化应激等损害胰岛β细胞,进而导致β细胞功能障碍及糖代谢紊乱,而作为AngⅡ生理性拮抗剂的血管紧张素（1-7）[Ang-（1-7）]可以降低糖尿病鼠胰岛β细胞凋亡率、改善胰岛局部炎症、氧化应激及胰岛素抵抗。但国内外关于Ang-（1-7）对高糖诱导的胰岛β细胞去分化的作用及机制尚不明确。本研究拟在探讨Ang-（1-7）对高糖诱导的胰岛β细胞病理性去分化的影响及可能机制,为糖尿病防治提供新靶点。方法:将小鼠胰岛素瘤细胞（MIN6细胞）用RPMI-1640培养基[10%胎牛血清（FBS）、1%青链霉素混合液]于37℃、5%CO2条件下常规传代培养。根据实验目的将细胞随机分组为以下几组:正常对照组、高糖组、高糖+Ang-（1-...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组MIN6细胞形态学变化
山西医科大学硕士学位论文16a：NGgroup;b：HGgroup;c：HG+Ang-(1-7)group;d:HG+Ang-(1-7)+A779group;e:HG+Ang-(1-7)+PI3K3.2各组MIN6细胞上清液中胰岛素浓度为了探讨Ang-(1-7)对高浓度葡萄糖诱导的MIN6细胞胰岛素分泌功能的影响，我们采用ELISA法检测Ang-(1-7)干预前后胰岛素分泌的变化。结果显示：对照组、高糖组、高糖+Ang-(1-7)组胰岛素浓度分别为53.5310.486ng/ml、112.5261.020ng/ml、138.2551.850ng/ml，差异具有统计学意义(P<0.005)。MIN6细胞在高糖刺激下，胰岛素分泌较对照组显著升高，可能是葡萄糖对MIN6细胞刺激作用，Ang-(1-7)干预后，胰岛素分泌较高糖刺激组升高，提示Ang-(1-7)可改善高糖刺激的MIN6细胞胰岛素分泌。图2Ang-(1-7)对高糖诱导的MIN6细胞胰岛素分泌功能的影响Figure2EffectofAng-(1-7)oninsulinsecretionofMIN6cellsinducedbyhighglucose*P＜0.05vs.NG组；#P<0.05vs.HG组*P＜0.05vs.NGgroup;#P<0.05vs.HGgroup3.3Ang-(1-7)对MIN6细胞特异性转录因子Pdx1、MafAmRNA以及去分化标记物Nanog、Oct4mRNA的影响
山西医科大学硕士学位论文18图3RT-PCR法检测MIN6细胞分化成熟标记物Pdx1、MafAmRNA以及去分化标记物去Oct4、NanogmRNA的改变。Figure3RT-PCRanalysesforrelativeexpressionofmarkersofβcellsspecialidentity(Pdx1,MafA)andprogenitorlikecellsmarkers(Ngn3,Oct4)inMIN6cells．*P<0.05vs.Con组；#P<0.05vs.DM组；＆P<0.05vs.HG+Ang-（1-7）组。*P<0.05vs.Congroup;#P<0.05vs.DMgroup;&P<0.05vs.HG+Ang-(1-7)group.3.4Ang-(1-7)对MIN6细胞内PI3K-Akt-FoxO1信号转导通路的影响为探讨Ang-(1-7)影响高糖诱导的MIN6细胞去分化的具体机制，我们通过Westernblot法检测各组PI3K-Akt-FoxO1通路相关因子p-Akt、Akt、FoxO1、p-FoxO1的蛋白表达情况。结果显示，与对照组相比，高葡萄糖刺激组（HG组）p-Akt、p-FoxO1蛋白表达水平显著降低（均P<0.05），而Ang-(1-7)预处理后p-Akt、p-FoxO1水平明显高于HG组（均P<0.05），但对Akt、FoxO1却无明显影响（P>0.05）。加入A779、LY492002则显著抑制Ang-(1-7)介导的细胞内p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的增加（均P<0.05）（图4,表2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]高糖通过下调FoxO1磷酸化诱导β细胞去分化[J]. 刘婵,郑晓雅,夏佳佳,任伟,李林蔓,刘兰. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(01)
[2]格列美脲起始治疗对新诊断2型糖尿病患者的有效性和安全性:GREAT研究亚组分析[J]. 郭晓蕙,吕肖锋,韩萍,张秀珍,杨华章,段文若,阎胜利,单忠艳,苏青,陈莉明,杜建玲,宋钦华,彭永德,成兴波,李启富,田浩明,王坚,姬秋和,高妍. 中华内分泌代谢杂志. 2012 (12)
本文编号：3475928
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组MIN6细胞形态学变化
山西医科大学硕士学位论文16a：NGgroup;b：HGgroup;c：HG+Ang-(1-7)group;d:HG+Ang-(1-7)+A779group;e:HG+Ang-(1-7)+PI3K3.2各组MIN6细胞上清液中胰岛素浓度为了探讨Ang-(1-7)对高浓度葡萄糖诱导的MIN6细胞胰岛素分泌功能的影响，我们采用ELISA法检测Ang-(1-7)干预前后胰岛素分泌的变化。结果显示：对照组、高糖组、高糖+Ang-(1-7)组胰岛素浓度分别为53.5310.486ng/ml、112.5261.020ng/ml、138.2551.850ng/ml，差异具有统计学意义(P<0.005)。MIN6细胞在高糖刺激下，胰岛素分泌较对照组显著升高，可能是葡萄糖对MIN6细胞刺激作用，Ang-(1-7)干预后，胰岛素分泌较高糖刺激组升高，提示Ang-(1-7)可改善高糖刺激的MIN6细胞胰岛素分泌。图2Ang-(1-7)对高糖诱导的MIN6细胞胰岛素分泌功能的影响Figure2EffectofAng-(1-7)oninsulinsecretionofMIN6cellsinducedbyhighglucose*P＜0.05vs.NG组；#P<0.05vs.HG组*P＜0.05vs.NGgroup;#P<0.05vs.HGgroup3.3Ang-(1-7)对MIN6细胞特异性转录因子Pdx1、MafAmRNA以及去分化标记物Nanog、Oct4mRNA的影响
山西医科大学硕士学位论文18图3RT-PCR法检测MIN6细胞分化成熟标记物Pdx1、MafAmRNA以及去分化标记物去Oct4、NanogmRNA的改变。Figure3RT-PCRanalysesforrelativeexpressionofmarkersofβcellsspecialidentity(Pdx1,MafA)andprogenitorlikecellsmarkers(Ngn3,Oct4)inMIN6cells．*P<0.05vs.Con组；#P<0.05vs.DM组；＆P<0.05vs.HG+Ang-（1-7）组。*P<0.05vs.Congroup;#P<0.05vs.DMgroup;&P<0.05vs.HG+Ang-(1-7)group.3.4Ang-(1-7)对MIN6细胞内PI3K-Akt-FoxO1信号转导通路的影响为探讨Ang-(1-7)影响高糖诱导的MIN6细胞去分化的具体机制，我们通过Westernblot法检测各组PI3K-Akt-FoxO1通路相关因子p-Akt、Akt、FoxO1、p-FoxO1的蛋白表达情况。结果显示，与对照组相比，高葡萄糖刺激组（HG组）p-Akt、p-FoxO1蛋白表达水平显著降低（均P<0.05），而Ang-(1-7)预处理后p-Akt、p-FoxO1水平明显高于HG组（均P<0.05），但对Akt、FoxO1却无明显影响（P>0.05）。加入A779、LY492002则显著抑制Ang-(1-7)介导的细胞内p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的增加（均P<0.05）（图4,表2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]高糖通过下调FoxO1磷酸化诱导β细胞去分化[J]. 刘婵,郑晓雅,夏佳佳,任伟,李林蔓,刘兰. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(01)
[2]格列美脲起始治疗对新诊断2型糖尿病患者的有效性和安全性:GREAT研究亚组分析[J]. 郭晓蕙,吕肖锋,韩萍,张秀珍,杨华章,段文若,阎胜利,单忠艳,苏青,陈莉明,杜建玲,宋钦华,彭永德,成兴波,李启富,田浩明,王坚,姬秋和,高妍. 中华内分泌代谢杂志. 2012 (12)
本文编号：3475928
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3475928.html
最近更新
教材专著
