实验一 微管蛋白折叠辅助因子B（TBCB）在星形胶质细胞突起形成中的作用及机制研究 实验二 水通道蛋白-4（AQP4）在

发布时间：2021-11-19 06:04

　　实验一微管蛋白折叠辅助因子B（TBCB）在星形胶质细胞突起形成中的作用及机制研究目的:探讨微管蛋白折叠辅助因子B（Tubulin folding cofactors B,TBCB）在星形胶质细胞中的作用、作用机制及调控机制。从TBCB对神经系统中星形胶质细胞（星胶细胞）的微管生物合成及动态平衡调节的角度入手,揭示TBCB在星胶细胞及其突起生长发育过程中的作用及机制,为临床提供理论基础。方法:实验分为三个部分,第一部分实验:研究TBCB在星形胶质细胞突起形成中的作用。原代培养小鼠星胶细胞,分别给与星胶细胞急、慢性酒精暴露,以及siRNA TBCB沉默处理。用Cell Counting Kit-8（CCK8）检测慢性酒精暴露对星胶细胞的活性影响。在免疫荧光（Immunoflourescent,IF）实验中,用多聚甲醛固定星胶细胞,保持细胞膜完整,检测胞浆内溶解的及与骨架蛋白结合的蛋白。用α-微管蛋白（α-tubulin,α-T）标记微管（MT）的形态变化,观察在不同的刺激下,TBCB与MT的表达变化,以及星胶细胞的形态变化,研究TBCB对微管的作用及该机制对星胶细胞突起生长的影响。用定量逆... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

星形胶质细胞的鉴定Fig1Identificationofastrocytes

重庆医科大学硕士研究生学位论文52附图图1星形胶质细胞的鉴定Fig1Identificationofastrocytes图A为原代提取的星形胶质细胞培养7天后IF检测GFAP；图B为第三代的星形胶质细胞IF检测GFAP。标尺=100um。图2急性酒精暴露后TBCB对星形胶质细胞突起生长的影响Fig2EffectsofTBCBonthegrowthanddevelopmentofastrocytesprotrusionafteracutealcoholexposure图A为IF检测α-tubulin（红）、TBCB（绿）在急性酒精暴露（100mM）0、1、6、12、24h后星胶内的表达变化情况，同时显示了细胞微管和突起的改变。A1-3为正常星胶细胞对照组（Con），A4-6为急性酒精暴露1h,A7-9为急性酒精暴露6h,A10-12为急性酒精暴露12h,A13-15为急性酒精暴露12h。图B为WB检测α-tubulin、TBCB蛋白表达变化和相对定量分析。与对照组相比，p<0.05。标尺=50um。

重庆医科大学硕士研究生学位论文53图3慢性酒精暴露后TBCB对星形胶质细胞生长的影响Fig3EffectsofTBCBongrowthanddevelopmentofastrocytesprotrusionafterchronicalcoholexposure图A为IF检测α-tubulin（红）、TBCB（绿）在慢性酒精暴露（0、30mM、100mM）7d后星胶内的表达变化，同时显示了细胞微管和突起的改变。A1-A6为星胶细胞正常对照组（Con），其中A4-6为A1-A3中方框1-3位置的放大图；A7-12为慢性酒精暴露组（30mM），其中A10-12为A7-A9中方框4-6位置的放大图；A13-18为慢性酒精暴露组（100mM），其中A16-18为A13-A15中方框7-9位置的放大图。图B为慢性酒精暴露后CCK8检测酒精对细胞活性的影响。图C为WB检测α-tubulin、TBCB蛋白表达变化和相对定量分析。图D为qRT-PCR检测TBCBmRNA表达变化。与对照组相比，p<0.05。标尺=20um。

【参考文献】：
期刊论文
[1]脑外伤后ERK信号通路调节AQP4及其锚定蛋白DG的表达[J]. 万珊珊,马佩莹,徐进,杨美,邱国平,卓飞,许士叶,张杲黎,霍介超,巨宇灿,刘辉.  中国生物化学与分子生物学报. 2019(08)
[2]p21-activated kinase signalling in pancreatic cancer: New insights into tumour biology and immune modulation[J]. Kai Wang,Graham S Baldwin,Mehrdad Nikfarjam,Hong He.  World Journal of Gastroenterology. 2018(33)



本文编号：3504441