当前位置:主页 > 硕博论文 > 医学硕士论文 >

在缺血再灌注中尿酸通过抑制HMGB1乙酰化减少TLR4/NF-κB激活起保护作用

发布时间:2021-11-26 06:57
  【目的】炎症反应在脑缺血再灌注损伤过程中起着重要作用。在以往的研究中,我们证明了合适浓度的尿酸(uric acid,UA)具有抗氧化作用,可以减少炎症反应,防止神经细胞严重损伤。然而,关于尿酸在脑缺血再灌注损伤过程中的保护机制目前尚不明确。本研究旨在探讨尿酸在体外缺血再灌注模型中的保护机制。【方法】我们利用小鼠海马神经元(HT22细胞)在体外构建氧糖剥夺再灌注(Oxygen-glucose deprivation reperfusion,OGD/R)模型模拟缺血再灌注模型,我们将小鼠海马神经元分为6组,分别为:对照组、OGD组、OGD/R组、OGD/R+HMGB1 si RNA组、OGD/R+尿酸组和OGD/R+尿酸+HMGB1蛋白组。我们使用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测HMGB1、TLR4、NF-κB-p65和磷酸化NF-κB-p65(p-NF-κB-p65)蛋白的表达情况。我们采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测6组中HT22的细胞活力。同时,我们采用流式细胞学的方法检测6组中HT22的细胞凋亡情况。除此之外,我们采用ELISA法检测细胞培养基... 

【文章来源】:广州医科大学广东省

【文章页数】:52 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

在缺血再灌注中尿酸通过抑制HMGB1乙酰化减少TLR4/NF-κB激活起保护作用


在缺氧/再灌注模型中,300μM的UA诱导的细胞存活率增加

过程图,细胞质,细胞,过程


广州医科大学硕士学位论文24组和OGD/R+尿酸+HMGB1组中,OGD/R组中细胞核和细胞质的HMGB1蛋白表达量显著上调(与对照组相比,相对表达量分别为1.6和1.8,P<0.05),但OGD组仅能显著上调胞浆HMGB1蛋白表达(P<0.05)(图2)。UA或HMGB1siRNA转染处理不影响OGD/R期间HMGB1在细胞核内的表达(与OGD/R组相比,P>0.05),但能显著下调胞浆HMGB1蛋白的表达(P<0.05)(图2C)。因此,UA可能在OGD/R过程中抑制HT22细胞核HMGB1乙酰化至细胞质,从而起调控作用。图2在OGD/R过程中,使用UA处理HT22细胞24h后HMGB1在细胞质和细胞核中的分布。A、采用Westernblotting检测不同组处理后的HMGB1在细胞质和细胞核中的表达。B、在OGD/R过程中,6组中细胞核内的HMGB1表达水平的定量比较。C、在OGD/R过程中,6组中细胞质的HMGB1表达水平的定量比较。*与对照组比较,P<0.05,表示有统计学意义。4.尿酸可以抑制HT22细胞OGD/R中HMGB1/TLR4/NF-κB通路为了进一步研究尿酸是如何通过HMGB1发挥作用的,我们研究HMGB1下游TLR4的蛋白表达。我们的实验数据显示:在对照组、OGD组、OGD/R组、OGD/R+HMGB1siRNA组、OGD/R+尿酸组和OGD/R+尿酸+HMGB1组中,OGD/R组能显著上调TLR4的表达(与对照组相比,相对表达水平为1.75,P<0.05),但加入UA或HMGB1siRNA转染处理后TLR4的上调表达不明显(P>0.05),而加入HMGB1蛋白处理后可以观察到TLR4的表达上调(P<0.05)(图3A,B)。因此,我们认为UA通过调节HMGB1/TLR4通路发挥保护作用。通常情况下,HMGB1/TLR4通路可以激活NF-κB,我们研究了TLR4的下游蛋白的表达情况。我们的实验数据显示:OGD和OGD/R可以上调NF-κB-p65和p-NF-κB-p65的表达(P<0.05);加入UA或HMGB1siRNA转染处理后可以抑制OGD/R的NF-κB-p65和p-NF-κB-p65上调的作用(图3A,B)。?

过程图,炎症,因子,过程


广州医科大学硕士学位论文26图3在OGD/R过程中,UA可以抑制TLR4/NF-κB通路的激活,减少炎症因子的水平。A、采用Westernblotting检测不同组处理后HT22细胞内的TLR4、NF-κB-p65和p-NF-κB-p65的表达。B、在OGD/R过程中,不同处理后HT22细胞内TLR4、NF-κB-p65和p-p65的表达水平定量比较。C、在OGD/R过程中,采用ELISA法检测培养液上清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;D、在OGD/R过程中,采用ELISA法检测培养液上清中炎症因子白细胞介素-1(IL-1)β和白细胞介素-6(IL-6)的水平。*与对照组比较,P<0.05,表示有统计学意义。6.在OGD/R模型中,尿酸可以提高HT22细胞活力并抑制细胞凋亡在对照组、OGD组、OGD/R组、OGD/R+HMGB1siRNA组、OGD/R+尿酸组和OGD/R+尿酸+HMGB1组中,我们的结果表明,与OGD/R组相比,UA和

【参考文献】:
期刊论文
[1]Overexpression of HMGB1 A-box reduced lipopolysaccharide-induced intestinal inflammation via HMGB1/TLR4 signaling in vitro[J]. Fu-Cai Wang,Jing-Xuan Pei,Jun Zhu,Nan-Jin Zhou,Dong-Sheng Liu,Hui-Fang Xiong,Xiao-Qun Liu,Dong-Jia Lin,Yong Xie.  World Journal of Gastroenterology. 2015(25)



本文编号:3519628

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3519628.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户19356***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com