HIF-1α基因沉默对精索静脉曲张大鼠睾丸生精功能的作用

发布时间：2021-12-12 04:18

　　目的:应用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建慢病毒载体以降低缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因在精索静脉曲张（varicocele,VC）大鼠睾丸组织中的表达。通过测定附睾精子的密度和活力,分析降低HIF-1α表达后对VC大鼠睾丸生精功能的改善作用;通过HE染色观察睾丸组织形态结构,分析降低HIF-1α表达后对VC大鼠睾丸组织形态的改善作用;通过检测凋亡相关蛋白,分析HIF-1α在诱导生精细胞凋亡中的作用,从而探索精索静脉曲张大鼠的生精功能改变机制。方法:1.构建慢病毒载体并感染于VC大鼠睾丸组织内30只SD大鼠随机分为对照组（C组）、VC模型组（V组）、VC+HIF-1α慢病毒组（H组）、VC+Luc慢病毒组（L组）,采用经典的左肾静脉部分结扎的方法制备VC模型。构建HIF-1α基因低表达的慢病毒载体,并选择滴度大于1×10⁹ TU/ml的慢病毒用于感染大鼠。2.HIF-1α在大鼠睾丸组织中的沉默效果慢病毒-HIF-1α和慢病毒-Luc分别转染于H组和L组大鼠睾丸,两个月后提取睾丸组织,通过RT-PCR、Western blot和免疫荧光技术检测HIF-... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠左侧精索静脉直径测量结果

山西医科大学硕士学位论文21图2菌落PCR鉴定结果Fig2.PCRidentificationresultsofmonoclonalcolonies2.3阳性克隆测序结果HIF-1α基因序列经过退火和磷酸化形成双链，然后与慢病毒载体lenticrisprv2进行连接，将重组产物送去生工生物进行测序。下图是重组载体测序图谱，测序图谱显示插入慢病毒的核苷酸序列与设计的序列一致，说明载体构建成功(图3)。图3阳性克隆的测序结果。A：HIF-1α慢病毒载体；B：Luc慢病毒载体。Fig3.Sequencingresultsofpositiveclones.A:HIF-1αlentivirusvector;B:Luclentivirusvector

山西医科大学硕士学位论文21图2菌落PCR鉴定结果Fig2.PCRidentificationresultsofmonoclonalcolonies2.3阳性克隆测序结果HIF-1α基因序列经过退火和磷酸化形成双链，然后与慢病毒载体lenticrisprv2进行连接，将重组产物送去生工生物进行测序。下图是重组载体测序图谱，测序图谱显示插入慢病毒的核苷酸序列与设计的序列一致，说明载体构建成功(图3)。图3阳性克隆的测序结果。A：HIF-1α慢病毒载体；B：Luc慢病毒载体。Fig3.Sequencingresultsofpositiveclones.A:HIF-1αlentivirusvector;B:Luclentivirusvector

【参考文献】：
期刊论文
[1]一氧化氮、一氧化氮合酶与伴精索静脉曲张不育患者精液参数的关系[J]. 许苑,徐庆阳,杨本海,朱向明,彭弋峰.  中华男科学杂志. 2008(05)

硕士论文
[1]缺氧在精索静脉曲张导致不育中的研究[D]. 曹欢.第二军医大学 2013



本文编号：3535994