PD-1/PD-L1抑制剂在LPS刺激的小鼠肺泡巨噬细胞中发挥抗凋亡和抗炎作用

发布时间：2021-12-12 06:58

　　目的:脓毒症是机体对感染反应失调引起的危及生命的器官功能障碍综合征,而肺脏是脓毒症主要的靶器官。脓毒症疾病发展引起的ALI及ARDS至今无特效的治疗药物,死亡率极高。因此,本实验研究的主要目的是明确PD-1/PD-L1抑制剂是否能减少肺泡巨噬细胞凋亡,恢复肺泡巨噬细胞免疫功能,提高清除细菌能力。另一方面,明确PD-1/PD-L1抑制剂是否能减少肺泡巨噬细胞炎症因子的释放,从而减轻炎症反应及肺组织损伤程度,起到肺保护作用。方法:在无菌的6孔板中培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,并将其分为对照组（control）,LPS和LPS+BMS-1组。将脂多糖（LPS）（10 ng/mL）添加到LPS和LPS+BMS-1组中培养24小时。随后,将PD-1/PD-L1抑制剂BMS-1（1μM）添加到LPS+BMS-1组中培养72小时。通过qRT-PCR检测PD-1 mRNA的表达水平;蛋白印迹检Western blot测PD-1蛋白表达水平;流式细胞术检测MH-S细胞凋亡情况;ELISA检测炎性因子IL-1β,IL-6,TNF-α和IL-10的水平。结果:小鼠肺泡巨噬细胞在分子和蛋白水平上均表达PD-1... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：35 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BMS-1的化学结构

山西医科大学（博）硕士学位论文52结果2.1BMS-1抑制LPS诱导的MH-S细胞中PD-1mRNA和蛋白的表达为了探索BMS-1对LPS诱导的MH-S细胞的影响，通过qRT-PCR和Westernblot方法评估了BMS-1对PD-1mRNA和PD-1蛋白的影响。与control组相比，LPS处理过的MH-S细胞中PD-1mRNA和蛋白表达水平明显升高。MH-S细胞经BMS-1干预后，与对照组相比，并未观察到PD-1mRNA或PD-1蛋白表达水平有显着差异。但值得注意的是，与LPS组相比，用BMS-1处理的MH-S细胞中PD-1mRNA和蛋白表达明显降低（图2、图3）。BMS-1能够抑制LPS诱导的MH-S细胞中PD-1的表达。图2.BMS-1对LPS诱导的MH-S细胞中PD-1mRNA表达的影响（用10ng/mLLPS刺激MH-S细胞24h，然后用1μMBMS-1干预72h。通过qRT-PCR方法检测处理的MH-S细胞中mRNA表达水平。实验重复三次。实验数据均表示为平均值±SD。*：LPS组与对照组比较，P=0.000，P<0.01；＆：LPS+BMS-1组与LPS组相比，P=0.003，P＜0.01。）

山西医科大学（博）硕士学位论文6图3.BMS-1对LPS诱导的MH-S细胞PD-1蛋白表达的影响(用10ng/mLLPS刺激MH-S细胞24h，然后用1μMBMS-1处理72h。通过Westernblot印迹测定处理的MH-S细胞中PD-1蛋白表达水平。实验重复三次。实验数据均表示为平均值±SD。*：LPS组与对照组比较，P<0.01；＆：LPS+BMS-1组与LPS组相比，P＜0.01。)2.2BMS-1抑制LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细胞凋亡为了研究BMS-1在LPS刺激的MH-S细胞中的凋亡作用，进行了流式细胞术并计算了凋亡细胞的数量。如图4所示，用LPS处理的MH-S细胞与对照组相比凋亡增强，而用BMS-1干预过的MH-S细胞凋亡明显较LPS组减弱。结合图2、图3的结果，LPS组PD-1表达增加，LPS+BMS-1组PD-1表达较LPS组明显降低。这说明LPS刺激后，小鼠肺泡巨噬细胞表现出高水平的PD-1与MH-S细胞凋亡增加程度呈正相关。用PD-1/PD-L1抑制剂BMS-1干预后，PD-1表达和肺泡巨噬细胞凋亡均降低。

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-155对脓毒症急性肺损伤肺泡巨噬细胞IL-6、IL-10及MIP-2的影响[J]. 付玉梅,周佳伟,刘凯,侯林义,张文凯.  中华重症医学电子杂志(网络版). 2019(02)
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本文编号：3536216