藤黄酸通过抑制EGFR/ERK/ZFP36信号通路杀伤结直肠癌干细胞的研究
发布时间：2021-12-15 17:15
[目的]注射用藤黄酸（Gambogic Acid,GA）作为一种新型的、高效广谱抗肿瘤药物,对减轻广大癌症患者的痛苦,提高患者的生活质量具有非常重要的作用。然而,藤黄酸是否抑制被认为是癌症治疗失败主要原因的肿瘤干细胞（Cancer Stem Cells,CSCs）,这在很大程度上尚不清楚。本研究探讨了藤黄酸是否抑制结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）的肿瘤干细胞扩增及其可能机制。[方法]本研究对结直肠癌细胞进行藤黄酸药物处理后,采用CCK-8实验来评估藤黄酸对结直肠癌肿瘤细胞的抑制作用;通过肿瘤球形成实验和流式细胞术对侧群细胞以及CD133+CD44+细胞的百分比进行比较和分析,并检测干细胞相关基因的表达,进而评估藤黄酸对结直肠癌肿瘤干细胞的杀伤作用。再进行mRNA微阵列鉴定受藤黄酸影响的下游基因,并进行Rescue实验,进一步阐明下游基因参与藤黄酸杀伤结直肠癌肿瘤干细胞的机制。本研究为了在体内和体外直观地观察肿瘤干细胞,构建了在Nanog启动子控制下的携带绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）和荧光素酶（Luciferase,Lu...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GA体外杀伤肿瘤活性的评价（A-B)用CCK-8法评估了经GA处理后的CRC细胞的增殖能力；(C)GA（0.5或1μmol/l）处理
广州医科大学硕士学位论文28图2GA对CRC肿瘤干细胞的杀伤作用（A)GA使CRC细胞的肿瘤球形成数量降低；(B)经GA处理后，HCT116细胞的CD133+CD44+细胞比例降低；(C)GA使SW480细胞中的SP细胞百分比降低；(D)GA对CD133+CD44+和非CD133+CD44+CRC细胞的抗肿瘤活性相同；(E)GA以及5-FU处理CRC细胞48h后进行CCK-8测定（*，P<0.05；**，P<0.01）。3、GA下调了结直肠癌肿瘤细胞中干细胞相关基因的表达干细胞相关的基因(即Nanog、Oct4、Sox2、ALDH1和Bmi-1)经常被用于从临床样本和各种癌细胞系中识别肿瘤干细胞的群体。为了评价GA治疗对CRC细胞干细胞相关基因表达的影响，采用RT-PCR和WB对具有代表性的干细胞标记物进行了分析。而研究结果显示：与对照组相比，实验组（GA处理组）的干细胞相关基因(Nanog、Oct4、ALDH1、CD133和Bmi-1)在RNA转录水平上的表达显著降低（图3A）。如图3B所示，干细胞相关基因表达(Nanog、Oct4、ALDH1和Bmi-1)在蛋白质水平上的表达也显著下降。综上所述，GA能显著下调结直肠癌肿瘤细胞中干细胞相关基因的表达。
结果29图3GA降低了CRC细胞中干性相关基因的表达。（A)通过RT-PCR检测对照组和实验组（GA处理）中CRC细胞的干细胞相关基因（ALDH1、Bmi-1、Nanog、Oct-4和CD133）表达，在mRNA水平上分析表达差异性；(B)采用WB技术，在蛋白质水平上分析对照组和实验组（GA处理）中CRC细胞干细胞相关基因（Bmi-1、Nanog、Oct-4和ALDH1）的表达差异性（*，P<0.05；**，P<0.01）。4、GA能显著下调EMT相关基因的表达，降低CRC细胞的迁移侵袭能力EMT已被证明为肿瘤干细胞的特征标志物之一[35]。因此，本研究通过RT-PCR和WB评估GA对CRC细胞EMT相关基因表达的影响。与预期一样，经GA处理的CRC细胞在转录水平上表现出间质分子特征，E-cadherin表达增加，N-cadherin、vimentin和纤连蛋白表达减少(图4A)。并通过WB技术进一步在蛋白质水平上验证β-catenin和vimentin表达的下降(图4B)。而为了进一步验证GA能否能降低CRC细胞的迁移侵袭能力，本研究运用Transwell迁移实验以及Boyden侵袭实验来评价GA对CRC细胞迁移侵袭能力的
【参考文献】：
期刊论文
[1]Gambogic Acid Induces Cell Apoptosis and Inhibits MAPK Pathway in PTEN-/-/p53-/- Prostate Cancer Cells In Vitro and Ex Vivo[J]. PAN Hong,LU Li-yuan,WANG Xue-qian,LI Bin-xue,Kathleen Kelly,LIN Hong-sheng. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2018(02)
硕士论文
[1]藤黄科的民族植物学研究[D]. 张昕勃.中央民族大学 2016
本文编号：3536833
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GA体外杀伤肿瘤活性的评价（A-B)用CCK-8法评估了经GA处理后的CRC细胞的增殖能力；(C)GA（0.5或1μmol/l）处理
广州医科大学硕士学位论文28图2GA对CRC肿瘤干细胞的杀伤作用（A)GA使CRC细胞的肿瘤球形成数量降低；(B)经GA处理后，HCT116细胞的CD133+CD44+细胞比例降低；(C)GA使SW480细胞中的SP细胞百分比降低；(D)GA对CD133+CD44+和非CD133+CD44+CRC细胞的抗肿瘤活性相同；(E)GA以及5-FU处理CRC细胞48h后进行CCK-8测定（*，P<0.05；**，P<0.01）。3、GA下调了结直肠癌肿瘤细胞中干细胞相关基因的表达干细胞相关的基因(即Nanog、Oct4、Sox2、ALDH1和Bmi-1)经常被用于从临床样本和各种癌细胞系中识别肿瘤干细胞的群体。为了评价GA治疗对CRC细胞干细胞相关基因表达的影响，采用RT-PCR和WB对具有代表性的干细胞标记物进行了分析。而研究结果显示：与对照组相比，实验组（GA处理组）的干细胞相关基因(Nanog、Oct4、ALDH1、CD133和Bmi-1)在RNA转录水平上的表达显著降低（图3A）。如图3B所示，干细胞相关基因表达(Nanog、Oct4、ALDH1和Bmi-1)在蛋白质水平上的表达也显著下降。综上所述，GA能显著下调结直肠癌肿瘤细胞中干细胞相关基因的表达。
结果29图3GA降低了CRC细胞中干性相关基因的表达。（A)通过RT-PCR检测对照组和实验组（GA处理）中CRC细胞的干细胞相关基因（ALDH1、Bmi-1、Nanog、Oct-4和CD133）表达，在mRNA水平上分析表达差异性；(B)采用WB技术，在蛋白质水平上分析对照组和实验组（GA处理）中CRC细胞干细胞相关基因（Bmi-1、Nanog、Oct-4和ALDH1）的表达差异性（*，P<0.05；**，P<0.01）。4、GA能显著下调EMT相关基因的表达，降低CRC细胞的迁移侵袭能力EMT已被证明为肿瘤干细胞的特征标志物之一[35]。因此，本研究通过RT-PCR和WB评估GA对CRC细胞EMT相关基因表达的影响。与预期一样，经GA处理的CRC细胞在转录水平上表现出间质分子特征，E-cadherin表达增加，N-cadherin、vimentin和纤连蛋白表达减少(图4A)。并通过WB技术进一步在蛋白质水平上验证β-catenin和vimentin表达的下降(图4B)。而为了进一步验证GA能否能降低CRC细胞的迁移侵袭能力，本研究运用Transwell迁移实验以及Boyden侵袭实验来评价GA对CRC细胞迁移侵袭能力的
【参考文献】：
期刊论文
[1]Gambogic Acid Induces Cell Apoptosis and Inhibits MAPK Pathway in PTEN-/-/p53-/- Prostate Cancer Cells In Vitro and Ex Vivo[J]. PAN Hong,LU Li-yuan,WANG Xue-qian,LI Bin-xue,Kathleen Kelly,LIN Hong-sheng. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2018(02)
硕士论文
[1]藤黄科的民族植物学研究[D]. 张昕勃.中央民族大学 2016
本文编号：3536833
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3536833.html
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