副交感神经M1受体参与自噬并影响前列腺癌进展的研究

发布时间：2021-12-19 08:17

　　目的:探讨副交感神经M1受体（muscarinic acetylcholine M1receptor,CHRM1）与前列腺癌细胞增殖、转移与抗凋亡之间的关系。初步探索CHRM1参与细胞自噬,并且影响肿瘤细胞进展及其可能的分子机制。方法:（1）选用裸鼠皮下成瘤法、Western blot、免疫荧光等方法观察CHRM1在前列腺癌组织及人体外细胞中表达情况。（2）体外培养前列腺癌细胞系细胞PC-3、LNCaP、DU145,用慢病毒感染方法建立CHRM1稳定敲低的细胞模型,加入其激动剂与抑制剂进行实验,用CCK8细胞增殖实验及平板克隆实验检测CHRM1对前列腺癌细胞增殖能力与细胞克隆能力,选用Transwell和细胞划痕试验检测细胞迁移与侵袭能力,选用流式细胞术和透射电镜下观察凋亡小体方法检测细胞凋亡情况。（3）稳定敲低CHRM1或加入抑制剂,选用qPCR、Western blot方法检测CHRM1对前列腺癌细胞上皮间质转化（EMT）相关的基因及蛋白表达水平。（4）选用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）及转染LC3的质粒等方法饥饿诱导前列腺癌细胞检测其细胞自噬水平。（5）上调或下调CHRM1... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

结果统计图；C）透射电镜结果

重庆医科大学硕士研究生学位论文35A）加入不同浓度CAR后透射电镜下自噬小体图。B）正常或饥饿条件下加入CAR或PIN后LC3及p62蛋白表达情况。C）图8B的Westernblot统计结果。D）加入CAR或PIN与对照对比作用不同时间WB检测LC3及p62表达情况。E）加或不加CAR在正常与饥饿情况下免疫荧光法激光共聚焦显微镜下结果显示LC3表达情况。F）PC-3细胞转染Ad-mCherry-GFP-LC3B质粒后加入CAR或PIN后检测细胞自噬流情况。G）运用稳定敲低CHRM1的PC-3细胞加或不加CAR后Westernblot检测LC3蛋白表达情况。H）运用稳定敲低CHRM1的PC-3细胞及对照细胞加入CAR后进行免疫荧光实验检测LC3表达。A)ElectronmicroscopyshowstheultrastructureofPCacellstreatedwithdifferentconcentrationsofCARincompletemediumfor24h;B)Westernblotwasperformedtodetectchangesinp62,LC3-II,orGAPDHtreatedwith2μMCARor200μMPINforupto24hunderserum-freemediumorcompletemedium(CTRL)conditionsforupto36h;C)StatisticsontheLC3-I/LC3-IIratioobtainedfromtheWesternblotresultsinFig.8B;D)Westernblotwasperformedtodetectchangesinp62,LC3-II,orGAPDHincubatedinserum-freemediumforupto36haftertheadditionofCARorPINcomparedwithnonspecificdrugs;E)LC3punctawere

与10H结果统计


本文编号：3544079