黄芪总皂苷通过ERK通路调控自噬缓解肺纤维化的实验研究
发布时间：2021-12-22 10:58
目的:本实验选用中药黄芪的主要组份黄芪总皂苷,通过动物实验和细胞实验来探讨黄芪总皂苷是否通过干预Ras/Raf/MEK/ERK信号通路调控自噬缓解肺纤维化,初步探讨黄芪总皂苷缓解肺纤维化的分子机制,为从中医药中寻求多靶点防治肺纤维化提供理论依据,同时为临床防治该疾病提供新的思路。方法:动物实验部分:通过博来霉素气管滴注的方法复制肺纤维化小鼠模型,造模完成后给予黄芪总皂苷灌胃。制作HE染色、Masson染色的病理切片观察空白对照组、模型组及药物干预组小鼠肺组织炎性细胞浸润与胶原沉积的情况;碱水解法检测羟脯胺酸的含量;实时荧光定量PCR（QPCR）法检测一型胶原（Col-I）、三型胶原（Col-III）的m RNA相对表达量;荧光双标的方法检测Col-I、Col-III蛋白的表达水平;WB的方法检测自噬相关基因LC3B-II、P62的蛋白表达水平;蛋白印迹法（Western blotting,WB）的方法检测Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的活化水平。细胞实验部分:MTS法筛选细胞实验最适给药浓度;TGF-β1刺激人肺成纤维细胞造模;给予黄芪总皂苷刺激,荧光双标的方法检测Col-I、...
【文章来源】：云南中医药大学云南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组小鼠肺组织HE染色结果（200）
云南中医药大学2020届硕士学位论文38况，且有纤维灶的形成；黄芪总皂苷组小鼠，经过博来霉素的刺激，再给予黄芪总皂苷药物干预，过量的胶原沉积的情况有所缓解。提示黄芪总皂苷可以一定程度缓解模型小鼠的肺部纤维化进程。1.3各组小鼠肺组织中羟脯胺酸含量表3不同组别中小鼠肺组织中HYP的含量（n=3,X±S，μg/mg）HYP空白对照组0.32±0.02模型组0.43±0.10**黄芪总皂苷干预组0.38±0.04▲▲注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。如表3，经过博来霉素刺激后，模型组小鼠肺组织中HYP含量与空白对照组相比明显上升，差异显著，且该差异有统计学意义（P＜0.01）；黄芪总皂苷干预组的小鼠肺组织中HYP含量均有明显降低（P＜0.01）。提示黄芪总皂苷可以缓解纤维化小鼠肺部胶原沉积。1.4小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相对表达水平表4不同组别中小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相对表达水平（n=3,X±S）Col-ICol-III空白对照组1±01±0模型组6.53±1.27**2.78±0.87**黄芪总皂苷干预组0.60±0.12▲▲0.18±0.04▲▲注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。图3不同组别中小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相对表达水平（n=3,X±S）注：NSnon-significant,*P<0.05,**P<0.01
黄芪总皂苷通过ERK通路调控自噬缓解肺纤维化的实验研究39各组小鼠肺组织中Col-I、Col-III的mRNA相对表达量的结果如表4，图3示，经过博来霉素刺激后，模型组Col-I、Col-III的mRNA相对表达量与空白对照组相比明显上升，差异显著，且该差异有统计学意义（P＜0.01）；黄芪总皂苷干预组的Col-I、Col-III的mRNA表达水平均有明显降低（P＜0.01）。提示黄芪总皂苷可以有效降低纤维化小鼠肺部胶原沉积。1.5小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA的蛋白表达量图4各组小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA的蛋白表达量(100×)如图4示，通过荧光三标的方法检测各组小鼠肺组织中Col-I、Col-III、α-SMA蛋白的表达水平，在绿色激发光照射下，可以明显观察到，模型组小鼠肺组织中的Col-I的表达水平与空白组相比显著增多，给予黄芪总皂苷干预后，Col-I的表达水平有所降低；在红色激发光照射下，模型组小鼠肺组织中的Col-III的表达水平与空白对照组相比明显升高，黄芪总皂苷组的小鼠肺组织中的Col-III表达水平与模型组比较明显降低；在粉色激发光照射下，可以明显观察到模型组小鼠肺组织中α-SMA的表达水平与空白对照组相比明显升高，而黄芪总皂苷组与模型组相比α-SMA的表达水平明显降低。综上结果，说明黄芪总皂苷可以有效减缓肺纤维化小鼠肺部胶原沉积，提示黄芪总皂苷有一定的抗纤维化的作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞自噬调节上皮细胞间充质转化过程对特发性肺纤维化的作用机制[J]. 苗双,丁国建,宋殿芳,张传厚,刘乃国,董洪亮. 医学研究生学报. 2019(10)
[2]自噬在肺纤维化中的作用机制[J]. 欧文芳,刘刚,王亚红,宋泽庆. 医学综述. 2019(09)
[3]肺纤维化中医认识及中西医治疗概况[J]. 刘晓,龚婕宁. 山东中医杂志. 2018(08)
[4]黄芪甲苷对特发性肺纤维化自噬活性作用及PI3K/Akt/mTOR信号调控的影响[J]. 徐昌君,王鹏飞,刘杨,黄雅薇,杨长福,赵宗江. 中国实验方剂学杂志. 2017(18)
[5]补肺汤对肺纤维化中自噬蛋白Cat-D,beclin-1,p62的影响[J]. 杨长福,刘杨,徐昌君,刘明,林昶,邓颖,朱星,欧江琴. 中国新药杂志. 2017(16)
[6]黄芪总皂苷抑制Notch信号通路抗胆汁性肝纤维化的作用机制[J]. 慕永平,张笑,范魏巍,李雪微,陈高峰,陈佳美,张华,刘平. 中华肝脏病杂志. 2017 (08)
[7]补阳还五汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺组织ERK表达的影响[J]. 杨晗,王飞,杨昆. 中华中医药杂志. 2017(04)
[8]Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展[J]. 王雪,张评浒. 中国药科大学学报. 2017(01)
[9]PKC介导的自噬在肝纤维化中的作用[J]. 尹瑞梨,时佳宏,潘奇正,周德山. 中国实验诊断学. 2017(01)
[10]细胞自噬与肺纤维化[J]. 张效云,李琦. 生理科学进展. 2015(04)
博士论文
[1]法舒地尔对肺纤维化的保护作用和吡非尼酮治疗肺纤维化的副作用[D]. 姜纯国.北京协和医学院 2013
硕士论文
[1]莪术主要成分激活自噬干预HLF细胞胶原合成的实验研究[D]. 刘洋.云南中医药大学 2019
[2]益肺散结方干预小鼠肺纤维化作用机理初步研究[D]. 戴晨.云南中医学院 2018
[3]线粒体自噬在肝纤维化中的作用[D]. 王苗苗.河北医科大学 2016
本文编号：3546279
【文章来源】：云南中医药大学云南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组小鼠肺组织HE染色结果（200）
云南中医药大学2020届硕士学位论文38况，且有纤维灶的形成；黄芪总皂苷组小鼠，经过博来霉素的刺激，再给予黄芪总皂苷药物干预，过量的胶原沉积的情况有所缓解。提示黄芪总皂苷可以一定程度缓解模型小鼠的肺部纤维化进程。1.3各组小鼠肺组织中羟脯胺酸含量表3不同组别中小鼠肺组织中HYP的含量（n=3,X±S，μg/mg）HYP空白对照组0.32±0.02模型组0.43±0.10**黄芪总皂苷干预组0.38±0.04▲▲注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。如表3，经过博来霉素刺激后，模型组小鼠肺组织中HYP含量与空白对照组相比明显上升，差异显著，且该差异有统计学意义（P＜0.01）；黄芪总皂苷干预组的小鼠肺组织中HYP含量均有明显降低（P＜0.01）。提示黄芪总皂苷可以缓解纤维化小鼠肺部胶原沉积。1.4小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相对表达水平表4不同组别中小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相对表达水平（n=3,X±S）Col-ICol-III空白对照组1±01±0模型组6.53±1.27**2.78±0.87**黄芪总皂苷干预组0.60±0.12▲▲0.18±0.04▲▲注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。图3不同组别中小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相对表达水平（n=3,X±S）注：NSnon-significant,*P<0.05,**P<0.01
黄芪总皂苷通过ERK通路调控自噬缓解肺纤维化的实验研究39各组小鼠肺组织中Col-I、Col-III的mRNA相对表达量的结果如表4，图3示，经过博来霉素刺激后，模型组Col-I、Col-III的mRNA相对表达量与空白对照组相比明显上升，差异显著，且该差异有统计学意义（P＜0.01）；黄芪总皂苷干预组的Col-I、Col-III的mRNA表达水平均有明显降低（P＜0.01）。提示黄芪总皂苷可以有效降低纤维化小鼠肺部胶原沉积。1.5小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA的蛋白表达量图4各组小鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA的蛋白表达量(100×)如图4示，通过荧光三标的方法检测各组小鼠肺组织中Col-I、Col-III、α-SMA蛋白的表达水平，在绿色激发光照射下，可以明显观察到，模型组小鼠肺组织中的Col-I的表达水平与空白组相比显著增多，给予黄芪总皂苷干预后，Col-I的表达水平有所降低；在红色激发光照射下，模型组小鼠肺组织中的Col-III的表达水平与空白对照组相比明显升高，黄芪总皂苷组的小鼠肺组织中的Col-III表达水平与模型组比较明显降低；在粉色激发光照射下，可以明显观察到模型组小鼠肺组织中α-SMA的表达水平与空白对照组相比明显升高，而黄芪总皂苷组与模型组相比α-SMA的表达水平明显降低。综上结果，说明黄芪总皂苷可以有效减缓肺纤维化小鼠肺部胶原沉积，提示黄芪总皂苷有一定的抗纤维化的作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞自噬调节上皮细胞间充质转化过程对特发性肺纤维化的作用机制[J]. 苗双,丁国建,宋殿芳,张传厚,刘乃国,董洪亮. 医学研究生学报. 2019(10)
[2]自噬在肺纤维化中的作用机制[J]. 欧文芳,刘刚,王亚红,宋泽庆. 医学综述. 2019(09)
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[4]黄芪甲苷对特发性肺纤维化自噬活性作用及PI3K/Akt/mTOR信号调控的影响[J]. 徐昌君,王鹏飞,刘杨,黄雅薇,杨长福,赵宗江. 中国实验方剂学杂志. 2017(18)
[5]补肺汤对肺纤维化中自噬蛋白Cat-D,beclin-1,p62的影响[J]. 杨长福,刘杨,徐昌君,刘明,林昶,邓颖,朱星,欧江琴. 中国新药杂志. 2017(16)
[6]黄芪总皂苷抑制Notch信号通路抗胆汁性肝纤维化的作用机制[J]. 慕永平,张笑,范魏巍,李雪微,陈高峰,陈佳美,张华,刘平. 中华肝脏病杂志. 2017 (08)
[7]补阳还五汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺组织ERK表达的影响[J]. 杨晗,王飞,杨昆. 中华中医药杂志. 2017(04)
[8]Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展[J]. 王雪,张评浒. 中国药科大学学报. 2017(01)
[9]PKC介导的自噬在肝纤维化中的作用[J]. 尹瑞梨,时佳宏,潘奇正,周德山. 中国实验诊断学. 2017(01)
[10]细胞自噬与肺纤维化[J]. 张效云,李琦. 生理科学进展. 2015(04)
博士论文
[1]法舒地尔对肺纤维化的保护作用和吡非尼酮治疗肺纤维化的副作用[D]. 姜纯国.北京协和医学院 2013
硕士论文
[1]莪术主要成分激活自噬干预HLF细胞胶原合成的实验研究[D]. 刘洋.云南中医药大学 2019
[2]益肺散结方干预小鼠肺纤维化作用机理初步研究[D]. 戴晨.云南中医学院 2018
[3]线粒体自噬在肝纤维化中的作用[D]. 王苗苗.河北医科大学 2016
本文编号：3546279
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