机械通气ARDS大鼠血浆外泌体对NRK-52E细胞自噬水平影响的初步研究
发布时间：2021-12-24 19:35
背景:急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是一种急性进行性呼吸衰竭,其临床特征表现为呼吸窘迫和顽固性低氧血症。ARDS在重症病房的发病率为10.4%,死亡率高达40%。多脏器衰竭是ARDS患者最主要死因,包括心、肝、肾、胃肠道等脏器功能衰竭,其中肾脏是最早发生衰竭的器官。据统计,ARDS患者发生急性肾脏衰竭（acute kidney injury,AKI）的比例约为44.3%。目前,机械通气是ARDS患者的主要治疗手段,有研究表明,ARDS机械通气患者发生AKI的几率是非机械通气患者的3倍。危重病患者发生AKI的危险因素研究发现,ARDS和机械通气分别是AKI的两个独立危险因素,但两者在AKI中的作用机制尚未完全明确。有研究认为机械通气的ARDS患者肺部会释放炎症因子及活性介质进入血流,经体循环到达肾脏诱发AKI。肾脏近端小管上皮细胞是AKI发生时各种应激源的重要靶点,在AKI动物模型中可见肾脏近端小管上皮细胞自噬水平升高。外泌体是粒径在30-200 nm之间的小囊泡,它由细胞主动分泌至胞外,广泛存在于体液中,它可将其内...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠肺脏肉眼观察A：对照组（盐水）；B：模型组（盐酸）
中文摘要35图2A：大鼠左肺组织病理HE染色观察。NS：生理盐水对照组，肺泡腔清晰，肺泡间隔连续；HCl：盐酸模型组，肺泡腔内大量中性粒细胞等炎症细胞浸润，并有大量红细胞渗出肺泡腔。红色箭头：肺泡塌陷；蓝色箭头：肺泡出血；黄色箭头：肺泡中性粒细胞；绿色箭头：肺泡巨噬细胞（alveolaredema）。图2B：大鼠肺组织损伤评分。盐酸模型组大鼠肺组织损伤分数显著升高，生理盐水对照组均分在2分以下，而盐酸模型组的肺损伤分数在5分以上，盐酸模型组相比生理盐水对照组其肺损伤分数明显上升，差异有统计学意义（p<0.05）。
广州医科大学硕士学位论文361.4动脉氧和指数（P/Fratio）造模后24小时，抽取盐酸模型组及盐水空白对照组的大鼠腹主动脉血液，立即进行血气分析，生理盐水对照组大鼠P/Fratio在430~512mmHg之间，而盐酸模型组大鼠P/Fratio在142~247mmHg之间，符合ARDS造模标准。盐酸模型组大鼠P/Fratio比对照组明显降低，差异有统计学意义，见图3。图3：大鼠腹主动脉血氧饱和指数。与生理盐水对照组相比，盐酸模型组大鼠动脉血氧饱和度显著下降（p<0.01）。第二部分结果：大鼠血浆外泌体的提取鉴定SD大鼠经气管灌注盐水后经24小时，采集大鼠腹腔静脉血，使用血浆外泌体提取试剂盒，按照产品说明书提取血浆外泌体，并使用BCA定量。透射电镜直接观察外泌体形态，结果显示提取的外泌体呈现圆形或椭圆形双层囊泡样结构，散在分布（图A）。westernblot结果显示外泌体标志膜蛋白CD81为阳性；外泌体膜结合蛋白TSG101为阳性；存在于其他类型囊泡，但不存在于外泌体中的蛋白calnexin为阴性（图B）。纳米颗粒跟踪分析仪分析外泌体，结果显示，从大鼠血浆分离的外泌体，颗粒直径处于30-200nm之间，其中绝大部分外泌粒子大小在107.5-163.5nm之间，最多外泌体颗粒直径为137nm，平均粒径约为135.5nm，符合外泌体粒径分布特征（图C）。颗粒总数为3.3×1010个/mL。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Lung epithelial cell-derived IL-25 negatively regulates LPS-induced exosome release from macrophages[J]. Zhi-Gang Li,Melanie J. Scott,Tomasz Brzóska,Prithu Sundd,Yue-Hua Li,Timothy R. Billiar,Mark A. Wilson,Ping Wang,Jie Fan. Military Medical Research. 2018(04)
[2]自噬流的检测方法[J]. 吕晓希,胡卓伟. 药学学报. 2016(01)
[3]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文编号：3551070
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠肺脏肉眼观察A：对照组（盐水）；B：模型组（盐酸）
中文摘要35图2A：大鼠左肺组织病理HE染色观察。NS：生理盐水对照组，肺泡腔清晰，肺泡间隔连续；HCl：盐酸模型组，肺泡腔内大量中性粒细胞等炎症细胞浸润，并有大量红细胞渗出肺泡腔。红色箭头：肺泡塌陷；蓝色箭头：肺泡出血；黄色箭头：肺泡中性粒细胞；绿色箭头：肺泡巨噬细胞（alveolaredema）。图2B：大鼠肺组织损伤评分。盐酸模型组大鼠肺组织损伤分数显著升高，生理盐水对照组均分在2分以下，而盐酸模型组的肺损伤分数在5分以上，盐酸模型组相比生理盐水对照组其肺损伤分数明显上升，差异有统计学意义（p<0.05）。
广州医科大学硕士学位论文361.4动脉氧和指数（P/Fratio）造模后24小时，抽取盐酸模型组及盐水空白对照组的大鼠腹主动脉血液，立即进行血气分析，生理盐水对照组大鼠P/Fratio在430~512mmHg之间，而盐酸模型组大鼠P/Fratio在142~247mmHg之间，符合ARDS造模标准。盐酸模型组大鼠P/Fratio比对照组明显降低，差异有统计学意义，见图3。图3：大鼠腹主动脉血氧饱和指数。与生理盐水对照组相比，盐酸模型组大鼠动脉血氧饱和度显著下降（p<0.01）。第二部分结果：大鼠血浆外泌体的提取鉴定SD大鼠经气管灌注盐水后经24小时，采集大鼠腹腔静脉血，使用血浆外泌体提取试剂盒，按照产品说明书提取血浆外泌体，并使用BCA定量。透射电镜直接观察外泌体形态，结果显示提取的外泌体呈现圆形或椭圆形双层囊泡样结构，散在分布（图A）。westernblot结果显示外泌体标志膜蛋白CD81为阳性；外泌体膜结合蛋白TSG101为阳性；存在于其他类型囊泡，但不存在于外泌体中的蛋白calnexin为阴性（图B）。纳米颗粒跟踪分析仪分析外泌体，结果显示，从大鼠血浆分离的外泌体，颗粒直径处于30-200nm之间，其中绝大部分外泌粒子大小在107.5-163.5nm之间，最多外泌体颗粒直径为137nm，平均粒径约为135.5nm，符合外泌体粒径分布特征（图C）。颗粒总数为3.3×1010个/mL。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Lung epithelial cell-derived IL-25 negatively regulates LPS-induced exosome release from macrophages[J]. Zhi-Gang Li,Melanie J. Scott,Tomasz Brzóska,Prithu Sundd,Yue-Hua Li,Timothy R. Billiar,Mark A. Wilson,Ping Wang,Jie Fan. Military Medical Research. 2018(04)
[2]自噬流的检测方法[J]. 吕晓希,胡卓伟. 药学学报. 2016(01)
[3]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文编号：3551070
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3551070.html
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