人诱导多能干细胞向成骨样细胞逐步诱导分化的研究
发布时间：2021-12-24 10:25
骨组织是人体行使运动、支撑、保护等功能的重要组成部分,但由外伤、感染、肿瘤和先天性疾病等因素造成的不同类型的骨缺损却非常常见,且是临床治疗中的难点之一,同样颌骨的缺损也一直是口腔外科、种植修复所面临的一大难题。目前,为解决骨的来源、排异反应及力学要求等问题,骨组织再生工程成为解决骨缺损修复临床治疗问题的有效途径之一。其中,骨组织工程的关键因素是成骨细胞,成骨细胞是骨形成的基础细胞,如何获得足够数量的成熟的成骨细胞也就成为目前骨组织工程在基础研究和临床应用中的关注重点。人诱导多能干细胞（human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）具有和人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,hESCs）一样的多能性,能进行无限增殖和分化为三胚层中的各种体细胞,且hiPSCs是由人体体细胞重编程获得的,避免了hESCs存在的伦理问题,在组织发育、药物筛选和细胞疗法等领域显示出良好的应用前景。因此本课题的主要研究目的是高效率诱导hiPSCs分化为成骨样细胞,为骨组织工程提供足够数量的高质量的种子细胞。针对目前hiPSCs成骨向诱导方法起...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
悬浮培养不同时间的拟胚体在成骨诱导分化过程中的细胞形貌图（悬浮培养时间分别为：3天、5天、7天和10天
兰州大学硕士学位论文人诱导多能干细胞向成骨样细胞逐步诱导分化的研究23图2-3悬浮培养不同时间的拟胚体在成骨诱导分化14天后的茜素红染色形貌图（a）和定量检测结果（b）（悬浮培养时间分别为：3天、5天、7天和10天。*表示p<0.05，**表示p<0.01。标尺：200μm）
兰州大学硕士学位论文人诱导多能干细胞向成骨样细胞逐步诱导分化的研究24图2-4悬浮培养不同时间的拟胚体在成骨诱导分化14天后相关蛋白（绿色）的免疫荧光结果（悬浮培养时间分别为：3天、5天、7天和10天。多能性蛋白：OCT4；成骨相关蛋白：RUNX2、COL1A1和OCN。细胞核经DAPI染色显示为蓝色。标尺：100μm）2.5本章小结综上所述，我们首先研究了hiPSCs悬浮培养3-10天过程中EBs的自发分化过程。基因表达定量结果显示，EBs在悬浮培养中会自发分化为中胚层细胞，继而分化为成骨细胞，这对构建hiPSCs定向成骨分化体外诱导体系具有重要价值。此外，RT-PCR结果证实，悬浮时间为4天的EBs含有最多的中胚层样细胞和间充质样细胞。同时，将悬浮不同时间形成的EBs接种在明胶表面，经成骨诱导培养基诱导分化14天后，茜素红染色结果显示，悬浮培养3~5天的EBs经成骨诱导后沉积的钙结节最大，钙盐沉积量最多，成骨分化效率更高。我们的研究结果对EB法从hiPSCs中提取MSC和成骨细胞具有重要的指导意义，必将促进hiPSCs在骨组织工程中的应用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Overexpression of Dlx2 enhances osteogenic differentiation of BMSCs and MC3T3-E1 cells via direct upregulation of Osteocalcin and Alp[J]. Jianfei Zhang,Wenbin Zhang,Jiewen Dai,Xudong Wang,Steve Guofang Shen. International Journal of Oral Science. 2019(02)
[2]氯原酸对成骨细胞Ⅰ型胶原及骨钙蛋白基因表达的影响[J]. 张珠,尹美珍,易继凌,王永红,殷义霞. 武汉理工大学学报. 2014(12)
[3]人胚胎干细胞向类间充质干细胞的诱导分化及鉴定[J]. 石伦刚,唐郑雅,陆峻泓,曹谊林,张文杰. 上海交通大学学报(医学版). 2009(03)
博士论文
[1]FGF-2和BMP-2诱导低密度人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成骨分化的协调机制研究[D]. 雷蕾.中南大学 2014
本文编号：3550315
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
悬浮培养不同时间的拟胚体在成骨诱导分化过程中的细胞形貌图（悬浮培养时间分别为：3天、5天、7天和10天
兰州大学硕士学位论文人诱导多能干细胞向成骨样细胞逐步诱导分化的研究23图2-3悬浮培养不同时间的拟胚体在成骨诱导分化14天后的茜素红染色形貌图（a）和定量检测结果（b）（悬浮培养时间分别为：3天、5天、7天和10天。*表示p<0.05，**表示p<0.01。标尺：200μm）
兰州大学硕士学位论文人诱导多能干细胞向成骨样细胞逐步诱导分化的研究24图2-4悬浮培养不同时间的拟胚体在成骨诱导分化14天后相关蛋白（绿色）的免疫荧光结果（悬浮培养时间分别为：3天、5天、7天和10天。多能性蛋白：OCT4；成骨相关蛋白：RUNX2、COL1A1和OCN。细胞核经DAPI染色显示为蓝色。标尺：100μm）2.5本章小结综上所述，我们首先研究了hiPSCs悬浮培养3-10天过程中EBs的自发分化过程。基因表达定量结果显示，EBs在悬浮培养中会自发分化为中胚层细胞，继而分化为成骨细胞，这对构建hiPSCs定向成骨分化体外诱导体系具有重要价值。此外，RT-PCR结果证实，悬浮时间为4天的EBs含有最多的中胚层样细胞和间充质样细胞。同时，将悬浮不同时间形成的EBs接种在明胶表面，经成骨诱导培养基诱导分化14天后，茜素红染色结果显示，悬浮培养3~5天的EBs经成骨诱导后沉积的钙结节最大，钙盐沉积量最多，成骨分化效率更高。我们的研究结果对EB法从hiPSCs中提取MSC和成骨细胞具有重要的指导意义，必将促进hiPSCs在骨组织工程中的应用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Overexpression of Dlx2 enhances osteogenic differentiation of BMSCs and MC3T3-E1 cells via direct upregulation of Osteocalcin and Alp[J]. Jianfei Zhang,Wenbin Zhang,Jiewen Dai,Xudong Wang,Steve Guofang Shen. International Journal of Oral Science. 2019(02)
[2]氯原酸对成骨细胞Ⅰ型胶原及骨钙蛋白基因表达的影响[J]. 张珠,尹美珍,易继凌,王永红,殷义霞. 武汉理工大学学报. 2014(12)
[3]人胚胎干细胞向类间充质干细胞的诱导分化及鉴定[J]. 石伦刚,唐郑雅,陆峻泓,曹谊林,张文杰. 上海交通大学学报(医学版). 2009(03)
博士论文
[1]FGF-2和BMP-2诱导低密度人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成骨分化的协调机制研究[D]. 雷蕾.中南大学 2014
本文编号：3550315
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3550315.html
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