miR-199a-5p/SIRT1介导NLRP3炎症小体调节LPS诱导BV2细胞炎性损伤机制研究

发布时间：2021-12-31 01:22

　　目的:本研究旨在通过构建体外BV-2细胞炎症模型,探讨miR-199a-5p对SIRT1的生物学调控功能,初步阐释在体外BV-2细胞炎症模型中miR-199a-5p调节炎性损伤的分子机制,为脑出血后继发性炎性损伤的干预治疗提供新的理论依据。方法:1.体外BV-2细胞炎症模型建立及验证、检测模型中miR-199a-5p及SIRT1的表达情况、SIRT1的亚细胞定位:利用CCK-8实验检测细胞的活力,qRT-PCR法、ELISA法及Western Blot法测定miR-199a-5p、SIRT1及促炎因子（IL-1β、IL-6）的相对表达量,免疫荧光染色显示SIRT1在BV-2细胞中亚细胞定位。2.验证miR-199a-5p与SIRT1的结合位点及调控关系:使用TargetScan、miRTarBase等生物信息软件预测miR-199a-5p与SIRT1的结合位点,并利用双荧光素酶报告基因实验验证;使用生物合成的miR-199a-5p mimic/inhibitor及阴性对照分别处理BV-2细胞,qRT-PCR法、Western Blot法测定miR-199a-5p、SIRT1的相对表达量... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

LPS刺激对BV-2细胞形态的影响

遵义医科大学硕士学位论文高扬33图2BV-2细胞炎性损伤程度与LPS的作用时间及作用浓度的关系。无LPS处理作为对照组（Control组）。予LPS（50ug/ml）刺激BV-2细胞作用不同时间点，A通过CCK-8实验检测细胞活力（n=3）；B、C通过qRT-PCR实验检测促炎因子IL-1β、IL6的相对表达量（n=3）。予不同浓度LPS刺激BV-2细胞48h，D通过CCK-8实验检测细胞活力（n=3）。予LPS（100ug/ml）刺激BV-2细胞48h，E通过qRT-PCR实验检测促炎因子IL-1β、IL6的相对表达量（n=3），F、G通过ELISA实验检测细胞培养上清液促炎因子IL-1β、IL6的浓度（n=3）。ns无统计学差异，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001。

遵义医科大学硕士学位论文高扬343.2BV-2细胞炎症模型中miR-199a-5p的表达增加通过建立体外BV-2细胞炎症模型，并测定模型中miR-199a-5p的相对表达量。如图3A所示，LPS组miR-199a-5p的相对表达明显高于Control组（**P＜0.01）。3.3在BV-2细胞中，miR-199a-5pmimic能明显增加miR-199a-5p的表达量，miR-199a-5pinhibitor能明显抑制miR-199a-5p的表达量BV-2细胞炎症模型中，miR-199a-5p的相对表达量明显增加，可能预示着miR-199a-5p在LPS诱导BV-2细胞炎性损伤过程中发挥重要作用。因此，通过利用miR-199a-5pmimic/inhibitor及阴性对照分别转染BV-2细胞，测定miR-199a-5p在BV-2细胞中的相对表达量。如图3B所示，miR-199a-5p在miR-199a-5pmimic组的相对表达明显高于mimicNC组（****P＜0.0001）；miR-199a-5p在miR-199a-5pinhibitor组的相对表达明显低于inhibitorNC组（**P＜0.01）。图3miR-199a-5p在BV-2细胞炎症模型中的表达情况及miR-199a-5pmimic/inhibitor转染BV-2细胞后miR-199a-5p的表达情况。无LPS处理作为对照组（Control组），通过qRT-PCR实验检测miR-199a-5p的相对表达量（n=3）。AmiR-199a-5p在Control组与LPS组的相对表达量。B转染BV-2细胞后miR-199a-5p在各组中的相对表达量。**P＜0.01，****P＜0.0001。


本文编号：3559352