基于邻位触发DNA纳米组装的乳腺癌细胞表面HER2二聚体原位成像新方法

发布时间：2022-01-02 06:34

　　细胞表面人表皮生长因子受体2（HER2）异常二聚体化是引起乳腺癌等肿瘤发生的关键驱动事件,是预测HER2靶向治疗效果的潜在新型标志物。但是HER2二聚体的临床应用研究却受制于缺乏简单实用、灵敏的细胞表面蛋白质二聚体分析技术。因此,HER2二聚体作为新型乳腺癌标志物的临床应用研究急需简单、灵敏、实用的蛋白二聚体原位检测新方法。本课题利用适体邻位杂交的特异性和无茎环式非线性HCR的高灵敏性,研发了一种适体共定位触发DNA纳米组装（CtDNA）的新策略用于HER2二聚体的原位放大成像。首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳、原子力显微镜和荧光分光光度计验证了无茎环式非线性HCR逐步组装形成DNA树枝状纳米结构的可行性。结果表明DNA树枝状纳米结构的组装具有较高的特异性、灵敏度和可控性。然后探索基于CtDNA策略用于乳腺癌细胞表面HER2/HER2同源二聚体和HER2/HER3异源二聚体检测的新方法。最后验证了新方法用于临床乳腺癌FFPE组织标本中HER2同源二聚体原位成像和定量分析的可行性。结果表明CtDNA策略是一种简单实用、灵敏的细胞表面蛋白质二聚体成像新技术,可用于乳腺癌HER2二聚体的原位检测。 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

基于邻位触发DNA纳米组装用于乳腺癌细胞表面HER2二聚体原位成像的示意图

重庆医科大学硕士研究生学位论文15图2A)聚丙烯酰胺凝胶电泳表征图。泳道1-4分别是S1、S2、B1、B2，泳道5是T和S1的反应产物，泳道6是T、S1和A1的反应产物，泳道7是T、S1、A1和S2的反应产物，泳道8是T、S1、A1、S2和A2的反应产物；B)泳道1-4分别是S1、S2、B1和B2，泳道5是S1、S2、A1、A2的反应产物，泳道6是T、S1、S2、A1、A2的反应产物；C)和D)分别是非线性HCR反应60分钟和90分钟的原子力显微镜图；E)是S1、S2、A1、A2反应产物的原子力显微镜图；F)荧光分光光度计表征图。S1（a），T和S1的反应产物(b)，T、S1、A1的反应产物(c)，T、S1、A1和S2的反应产物(d)，T、S1、A1、S2和A2的反应产物(e)。

重庆医科大学硕士研究生学位论文17图3聚丙烯酰胺凝胶电泳表征图。A)泳道1-2分别是T与SS1-4、SS2-4和PS12-4的反应产物，泳道3-4分手别是T与SS1-5、SS2-5和PS12-5的反应产物，泳道5-6分别是T与SS1-6、SS2-6和PS12-6的反应产物，泳道7-8分手别是T与SS1-8、SS2-8和PS12-8的反应产物；B)中泳道1-4分别是Apt1、Apt2、T、PS12–6，泳道5是T和Apt1的混合产物，泳道6是T和Apt2的混合产物，泳道7是T、Apt1和Apt2的反应产物，泳道8是T和PS12–6的反应产物；Fig.3A)PAGEanalysisofthereactionproductsofTwithSS1-4andSS2-4(lane1),PS12-4(lane2),SS1-5andSS2-5(lane3),PS12-5(lane4),SS1-6andSS2-6(lane5),PS12-6(lane6),SS1-8andSS2-8(lane7),PS12-8(lane8)afterincubationfor60min,respectively.B)PAGEanalysisofsingleApt1,Apt2,T,andPS12–6(Lanes1–4),andthereactionproductsofTandApt1(Lane5),TandApt2(Lane6),T,Apt1andApt2(Lane7),andTandPS12–6(Lane8),respectively.图4Apt1、Apt2、T或Apt-T诱导的非线性HCR用于孔板上HER2单体蛋白的荧光分析。Fig.4FluorescenceanalysisofnonlinearHCRproductsinducedwithApt1,Apt2,andT,orsingleApt-TtestedinHER2monomerprotein-coatedplatewells.

【参考文献】：
期刊论文
[1]Cell-SELEX-based aptamer-conjugated nanomaterials for enhanced targeting of cancer cells[J]. KONG RongMei, CHEN Zhuo, YE Mao, ZHANG XiaoBing & TAN WeiHong State Key Laboratory for Chemo/Biosensing and Chemometrics; College of Chemistry and Chemical Engineering, Hunan University, Changsha 410082, China.  Science China（Chemistry）. 2011(08)



本文编号：3563669