miR-211-5p通过下调COX2的表达改善大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

发布时间：2022-01-02 13:30

　　第一部分mi R-211-5p对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤的影响目的:筛选出在局灶性脑缺血再灌注（MCAO/R）大鼠脑中有明显表达变化的mi RNAs;观察mi R-211-5p与COX2在MCAO/R大鼠皮层和海马再灌注时间不同情况下的表达变化,并分析其相关性;通过给予mi R-211-5pagomir和antagomir进行干预观察其对MCAO/R大鼠脑损伤的影响,以及对COX2及其下游产物、相关炎症因子的影响。方法:1.生物信息学初筛mi RNAs在本研究中,我们希望找到靶向COX2内源性表达的mi RNAs以抑制炎症。我们使用靶标预测数据库（Target Scan,mi RBase和mi Randa）评估哪些mi RNAs能靶向COX2基因。在三个数据库中均能被检索到的mi RNA用于缺血再灌注损伤大鼠脑组织表达检测,以确定后续观察研究采用的mi RNA。2.MCAO/R大鼠脑卒中模型建立雄性8周龄SD大鼠,用1%戊巴比妥钠（45mg/kg）腹腔麻醉,于右侧颈总动脉插入尼龙栓线（L3600,广州佳灵）至大脑中动脉起始段（栓线插入深度约18mm）,阻塞右侧大脑中动脉血流90mi... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠局灶脑缺血再灌注损伤模型（x±SD,n=3）

重庆医科大学硕士研究生学位论文30组。图1大鼠局灶脑缺血再灌注损伤模型（x±SD,n=3）Fig.1Ratmodeloffocalcerebralischemiareperfusion（MCAO/R）injury（mean±SD,n=3）2.3局灶脑缺血再灌注24小时大鼠皮层及海马miRNAs的表达如图2A和2B所示，与假手术组相比，模型组miR-211-5p与miR-204-5p在皮层显著下降，海马显著上升。考虑到在生物信息学网站targetscan检测，miR-211-5p与COX2的结合分数比miR-204-5p要高，因此，后续实验以miR-211-5p为主要观察目标。图2miRNAs在局灶脑缺血再灌注24小时大鼠皮层及海马的变化（x±SD,n=3）Fig.2ChangesofmiRNAsincortexandhippocampusinMCAO/R-treatedrats（mean±SD,n=3）*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001VSShamgroup2.4免疫荧光双标观察大脑皮层与海马神经元的分布图3A红色Neun为神经元标记蛋白，蓝色DAPI为细胞核特异染色。从图

重庆医科大学硕士研究生学位论文31可以看出，大鼠皮层和海马神经元占比不同。通过ImageJ软件计算（Neun数目/DAPI数目）出，皮层神经元阳性细胞率约占57%，海马神经元阳性细胞率约占97%。图3免疫荧光双标观察大脑皮层与海马神经元的分布（x±SD,n=3）Fig.3Neuronaldistributionofratcortexandhippocampalbyimmunofluorescencedoublestandardstaining（mean±SD,n=3）2.5miR-211-5p与COX2在SD大鼠皮层、海马以及血浆的表达变化通过q-PCR实验可以看出，COX2mRNA的表达在体内外均是先升高后降低的，皮层和海马均在再灌注12h达到峰值（图4B,D），这表明在局灶缺血再灌注模型中炎症的水平是先升高后降低的。miR-211-5p在皮层呈现先降低后升高的趋势，12h达到谷值（图4A）；在海马呈现先升高后降低的趋势，48h达到峰值（图4C）；与假手术组相比，模型组大鼠血浆miR-211-5p明显降低，COX2mRNA与蛋白明显升高（图4E-G）。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3564263