基于纳米石墨烯和羟基氧化钴荧光检测脑钠肽及其心衰诊断性能评估

发布时间：2022-01-11 05:10

　　心衰是一种复杂的临床综合征,其病情发展快,预后差,死亡率及再入院率高。其在儿童时期属于较为常见的急危重症,若未及时诊断治疗,可危及患儿生命。心衰标志物的监测对于心衰的早期诊断和及时干预尤为重要,响应于心室壁压力超负荷而增加分泌的脑钠肽已是国际公认的心衰标志物。化学发光免疫分析法、酶联免疫吸附测定和免疫层析法等多种方法已被报道用于脑钠肽的检测,但这些方法存在灵敏度不够或易受干扰等缺点。因此,本文基于纳米氧化石墨烯和羟基氧化钴开发了两种用于脑钠肽超灵敏检测的荧光适体传感器。本文的主要研究内容如下:第一部分:基于氧化石墨烯的荧光适体传感器用于脑钠肽的超灵敏检测为实现对儿童心衰的早期诊断,开发了一种用于心衰标志物?脑钠肽（BNP）超灵敏检测的荧光共振能量转移（FRET）平台。已可商业化购买、成本低、性质稳定的氧化石墨烯被用作能量受体,而荧光染料标记的核酸适配体被用作能量供体及BNP特异性识别元件。基于存在BNP时的FRET“开”的状态（强的荧光发射）和不存在BNP时FRET“关”的状态（荧光猝灭）,实现了BNP的超灵敏检测,线性范围为0.074?0.56 pg/mL,检出限为0.045 pg/... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

用于BNP检测的FRET平台示意图

重庆医科大学硕士研究生学位论文18图1.2加入不同试剂后体系的荧光发射光谱Fig.1.2Fluorescenceemissionspectraofthesystemwiththeadditionofdifferentreagents.TheconcentrationsofFAMaptamer,GO,andBNPwere3.75nmol/L,20μg/mL,and0.30pg/mL,respectively.2.3机制研究2.3.1原子力显微镜表征利用AFM研究了GO与FAMaptamer和BNP作用前后的表面形貌。如图1.3所示，GO纳米片的平均厚度约为1.5nm，表明GO纳米片在溶液中分散良好，几乎都是以单层或双层形式存在[43]。加入FAMaptamer后，在GO纳米片的表面出现了一些平均高度约为5.0nm的“岛”，说明FAMaptamer吸附在了GO表面。然而，当BNP加入后，纳米片的高度又恢复到了1.5nm，同时在纳米片的旁边形成了许多高度约为60nm的复合物，表明FAMaptamer能以更强的作用力与BNP结合。DLS测试结果（图1.4）与AFM表征结果一致。但由于DLS测定的是水合粒径，因此DLS测得的尺寸分布比AFM测量的大[44]。

重庆医科大学硕士研究生学位论文19图1.3（A）GO；（B）GO和FAMaptamer混合物；（C）GO、FAMaptamer和BNP混合物的AFM图像和高度测量Fig.1.3AFMimagesandheightmeasurementsof(A)GO,(B)themixtureofGOandFAMaptamer,and(C)themixtureofGO,FAMaptamerandBNP.ThefinalconcentrationsofFAMaptamer,GO,andBNPwere3.75nmol/L,20μg/mL,and0.30pg/mL,respectively.图1.4动态光散射粒径分布图Fig.1.4Thedynamiclightscattering(DLS)measurementsofGO,FAMaptamerGOcomplex,andthemixtureofFAMaptamerGOandBNP.Finalconcentrations:FAMaptamer,0.125μmol/L;GO,20μg/mL;BNP,0.32pg/mL.2.3.2圆二色光谱圆二色光谱（CD，图1.5A）显示，BNP仅在202nm处表现出负的圆二色信号，对应蛋白质的无规卷曲结构。适配体分别在278nm和243nm处显示出正的

【参考文献】：
期刊论文
[1]A New Method for Blood NT-proBNP Determination Based on a Near-infrared Point of Care Testing Device with High Sensitivity and Wide Scope[J]. ZHANG Xiao Guang,SHU Yao Gen,GAO Ju,WANG Xuan,LIU Li Peng,WANG Meng,CAO Yu Xi,ZENG Yi.  Biomedical and Environmental Sciences. 2017(06)



本文编号：3582153