低强度激光与骨微穿孔术联合应用对大鼠正畸牙齿移动的影响
发布时间：2022-01-19 19:45
目的:建立动物正畸牙齿移动模型,观察大鼠牙齿移动距离和牙周组织改建情况,比较单独应用低强度激光或者骨微穿孔术,以及联合应用这两种方法加速正畸牙齿移动的效果。方法:1、确定有效激光剂量:选择SD大鼠21只,随机分成激光组（激光照射+加力,15只）、对照组（仅加力,3只）和空白组（无任何处理,3只）。按照射时间的长短,激光组又分成5组（A组:10s、B组:25s、C组:50s、D组:75s、E组:100s）。激光组与对照组均建立双侧上颌第一磨牙的正畸模型,各激光组还需在建模的第0-6天连续照射激光,每日1次。在建模第7天时处死大鼠,采用二次印模法记录大鼠建模前后牙移动距离,并取大鼠上颌骨制作组织切片。经HE染色后观察牙槽骨改建情况及牙周膜组织形态和细胞组成的变化,筛选出能加速正畸的有效激光剂量用于后续实验。2、探索不同干预措施下的正畸牙移动效果:选择SD大鼠60只,随机分成4组,即LLL组（激光照射+加力）、MOPs组（骨微穿孔术+加力）、联合组（骨微穿孔术+激光照射+加力）和对照组。每组15只,分别于建模后第1、3、5、7、14天各处死3只。同样方法记录建模前后牙移动距离,并取双侧上颌骨...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠正畸模型建立过程
遵义医科大学硕士学位论文马锐12正畸模型建立完成后，每天检查镍钛拉簧有无损坏和脱落，若发现脱落应立即重新安装；将固体颗粒饲料用经严格消毒的饮用水湿润，待颗粒发胀软化后喂食大鼠，每日更换饲料，降低大鼠加力装置脱落风险。1.2.3正畸牙移动距离的测量经腹腔注射过量水合氯醛处死大鼠，取出镍钛拉簧，再次制取上牙列印模，注入超硬石膏备用。参照李高华等[38]的测量方法，将同一大鼠正畸前后的石膏模型分别水平放置于体视显微镜下，使牙齿咬合面与观测台平行，通过LeicaApplicationSuiteV4测量软件（设置精度为0.0001mm）测量上颌第一磨牙与第二磨牙咬合面中央牙尖远中边缘嵴之间的距离，测量3次，取平均值（图2）。将建模后测量数值减去建模前测量数值，即得到牙移动距离（Orthodontictoothmovement，OTM）。图2正畸牙齿移动距离的测量（×20）a：建模前测量b：建模后测量Fig.2Measurementoforthodontictoothmovementdistance(×20)a:Measurementbeforemodelingb:Measurementaftermodeling1.2.4标本的采集与处理解剖取出双侧上颌骨，剔除软组织后将上颌标本放入4％多聚甲醛液内，固定48小时后转移至10%EDTA脱钙液中室温脱钙4周，隔天更换EDTA液，直到针尖能够无阻力刺穿牙齿。脱钙完成后将标本送至遵义医科大学附属医院病理科行常规石蜡包埋、切片，厚2μm。将切好的片子放入56℃温水中展平，并贴片于载玻片上用于HE染色和TRAP染色。1.2.5苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosinstaining，HE）将上颌骨石蜡切片置于75℃恒温箱中烘烤20min，然后放入全自动HE染色机配套的载玻片架中，上机后按设定好的程序染色（图3）。完成染色后将切片放入自动封片机，中性树胶封片。
遵义医科大学硕士学位论文马锐13图3石蜡切片HE染色步骤Fig.3StepsofHEstaininginparaffinsections1.2.6抗酒石酸酸性磷酸酶染色（tartrate-resistantacidphosphatase，TRAP）（1）染色前准备：将石蜡切片置于75℃恒温箱中烘烤2小时取出，待冷却至室温时放入切片盒待用，染色前取出于75℃恒温箱内烘烤15min。（2）脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各脱蜡20min，100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各水化5min，自来水洗30s，蒸馏水洗三遍。（3）配制工作液：亚硝酸钠与副品红溶液各取50ul混合均匀，加入醋酸钠缓冲溶液1.8ml混匀，再加入萘酚AS-BI磷酸酯液0.1ml，称取酒石酸钾钠0.0282g最后加入，充分溶解即为工作液，工作液即配即用。（4）孵育染色：将工作液滴加于切片组织上，置于37℃恒温箱孵育2h，蒸馏水洗3遍。（5）苏木素染色：切片入苏木素染液染4min，自来水洗30s，1%盐酸酒精分化5s，流动自来水冲洗3min。（6）脱水封片：切片依次放入95%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、100%乙醇中各脱水5min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各透明5min，中性树胶封片。（7）在显微镜下随机选择5个视野，计数TRAP阳性细胞数量，结果取平均值。1.3统计学方法应用spss18.0统计学处理软件，采用单因素方差分析比较各组大鼠牙移动距离及破骨细胞计数，采用Dunnett、Tukey检验法对各组均数之间进行两两比较，P<0.05表示差异有统计学意义，实验结果以均数±标准差（sx）表示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]口腔微生物耐氟机制的研究进展[J]. 马锐,郭饶,王倩,刘建国,管晓燕. 微生物学通报. 2020(05)
[2]低强度激光疗法对肿瘤细胞凋亡影响的研究进展[J]. 李振鹏,杨小红,任镜清,罗辉兴,刘少杰. 中国现代医学杂志. 2020(09)
[3]CC趋化因子受体2缺失降低正畸牙齿运动中破骨细胞和成骨细胞活性的研究[J]. 邢洪波,许桓溪,朱雪梅. 海军医学杂志. 2019(04)
[4]正畸牙移动的实验模型研究进展[J]. 龙茜,管晓燕,刘建国. 遵义医学院学报. 2019(02)
[5]物理方法加速正畸牙移动的研究进展[J]. 王诗哲,潘晓岗. 中国实用口腔科杂志. 2019(04)
[6]不同强度的低能量激光照射对正畸牙齿移动速度影响的临床研究[J]. 姜委杰,刘珺,林炜,弋中萍,刘昌翠,张晨. 全科口腔医学电子杂志. 2019(07)
[7]中草药在口腔正畸及牙周炎症治疗中的研究进展[J]. 胡紫菱,朱光勋. 临床口腔医学杂志. 2019(01)
[8]正畸治疗与牙周软组织健康的关系及处理[J]. 赵蕾,王晓宇,徐屹,孟姝. 华西口腔医学杂志. 2018(06)
[9]过量氟对大鼠成釉细胞KLK4蛋白表达的影响[J]. 王光平,顾瑜,吴迪,初可嘉,熊璟,管晓燕,季伯,李绍岳,刘建国. 中国地方病防治杂志. 2018(03)
[10]微创伤手术对加速正畸牙齿移动研究的系统评价[J]. 付腾飞,宋林,张瑞,曹猛. 实用口腔医学杂志. 2018(02)
硕士论文
[1]微骨穿孔在加速正畸牙齿移动中作用的研究[D]. 付腾飞.中国人民解放军空军军医大学 2018
[2]Micro-CT观测半导体激光照射对牙移动的影响[D]. 谭荣.河北医科大学 2017
[3]弱激光照射对大鼠正畸移动牙牙周破骨细胞分化及PI3K/Akt通路影响的研究[D]. 孙娜.青岛大学 2015
本文编号：3597451
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠正畸模型建立过程
遵义医科大学硕士学位论文马锐12正畸模型建立完成后，每天检查镍钛拉簧有无损坏和脱落，若发现脱落应立即重新安装；将固体颗粒饲料用经严格消毒的饮用水湿润，待颗粒发胀软化后喂食大鼠，每日更换饲料，降低大鼠加力装置脱落风险。1.2.3正畸牙移动距离的测量经腹腔注射过量水合氯醛处死大鼠，取出镍钛拉簧，再次制取上牙列印模，注入超硬石膏备用。参照李高华等[38]的测量方法，将同一大鼠正畸前后的石膏模型分别水平放置于体视显微镜下，使牙齿咬合面与观测台平行，通过LeicaApplicationSuiteV4测量软件（设置精度为0.0001mm）测量上颌第一磨牙与第二磨牙咬合面中央牙尖远中边缘嵴之间的距离，测量3次，取平均值（图2）。将建模后测量数值减去建模前测量数值，即得到牙移动距离（Orthodontictoothmovement，OTM）。图2正畸牙齿移动距离的测量（×20）a：建模前测量b：建模后测量Fig.2Measurementoforthodontictoothmovementdistance(×20)a:Measurementbeforemodelingb:Measurementaftermodeling1.2.4标本的采集与处理解剖取出双侧上颌骨，剔除软组织后将上颌标本放入4％多聚甲醛液内，固定48小时后转移至10%EDTA脱钙液中室温脱钙4周，隔天更换EDTA液，直到针尖能够无阻力刺穿牙齿。脱钙完成后将标本送至遵义医科大学附属医院病理科行常规石蜡包埋、切片，厚2μm。将切好的片子放入56℃温水中展平，并贴片于载玻片上用于HE染色和TRAP染色。1.2.5苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosinstaining，HE）将上颌骨石蜡切片置于75℃恒温箱中烘烤20min，然后放入全自动HE染色机配套的载玻片架中，上机后按设定好的程序染色（图3）。完成染色后将切片放入自动封片机，中性树胶封片。
遵义医科大学硕士学位论文马锐13图3石蜡切片HE染色步骤Fig.3StepsofHEstaininginparaffinsections1.2.6抗酒石酸酸性磷酸酶染色（tartrate-resistantacidphosphatase，TRAP）（1）染色前准备：将石蜡切片置于75℃恒温箱中烘烤2小时取出，待冷却至室温时放入切片盒待用，染色前取出于75℃恒温箱内烘烤15min。（2）脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各脱蜡20min，100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各水化5min，自来水洗30s，蒸馏水洗三遍。（3）配制工作液：亚硝酸钠与副品红溶液各取50ul混合均匀，加入醋酸钠缓冲溶液1.8ml混匀，再加入萘酚AS-BI磷酸酯液0.1ml，称取酒石酸钾钠0.0282g最后加入，充分溶解即为工作液，工作液即配即用。（4）孵育染色：将工作液滴加于切片组织上，置于37℃恒温箱孵育2h，蒸馏水洗3遍。（5）苏木素染色：切片入苏木素染液染4min，自来水洗30s，1%盐酸酒精分化5s，流动自来水冲洗3min。（6）脱水封片：切片依次放入95%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、100%乙醇中各脱水5min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各透明5min，中性树胶封片。（7）在显微镜下随机选择5个视野，计数TRAP阳性细胞数量，结果取平均值。1.3统计学方法应用spss18.0统计学处理软件，采用单因素方差分析比较各组大鼠牙移动距离及破骨细胞计数，采用Dunnett、Tukey检验法对各组均数之间进行两两比较，P<0.05表示差异有统计学意义，实验结果以均数±标准差（sx）表示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]口腔微生物耐氟机制的研究进展[J]. 马锐,郭饶,王倩,刘建国,管晓燕. 微生物学通报. 2020(05)
[2]低强度激光疗法对肿瘤细胞凋亡影响的研究进展[J]. 李振鹏,杨小红,任镜清,罗辉兴,刘少杰. 中国现代医学杂志. 2020(09)
[3]CC趋化因子受体2缺失降低正畸牙齿运动中破骨细胞和成骨细胞活性的研究[J]. 邢洪波,许桓溪,朱雪梅. 海军医学杂志. 2019(04)
[4]正畸牙移动的实验模型研究进展[J]. 龙茜,管晓燕,刘建国. 遵义医学院学报. 2019(02)
[5]物理方法加速正畸牙移动的研究进展[J]. 王诗哲,潘晓岗. 中国实用口腔科杂志. 2019(04)
[6]不同强度的低能量激光照射对正畸牙齿移动速度影响的临床研究[J]. 姜委杰,刘珺,林炜,弋中萍,刘昌翠,张晨. 全科口腔医学电子杂志. 2019(07)
[7]中草药在口腔正畸及牙周炎症治疗中的研究进展[J]. 胡紫菱,朱光勋. 临床口腔医学杂志. 2019(01)
[8]正畸治疗与牙周软组织健康的关系及处理[J]. 赵蕾,王晓宇,徐屹,孟姝. 华西口腔医学杂志. 2018(06)
[9]过量氟对大鼠成釉细胞KLK4蛋白表达的影响[J]. 王光平,顾瑜,吴迪,初可嘉,熊璟,管晓燕,季伯,李绍岳,刘建国. 中国地方病防治杂志. 2018(03)
[10]微创伤手术对加速正畸牙齿移动研究的系统评价[J]. 付腾飞,宋林,张瑞,曹猛. 实用口腔医学杂志. 2018(02)
硕士论文
[1]微骨穿孔在加速正畸牙齿移动中作用的研究[D]. 付腾飞.中国人民解放军空军军医大学 2018
[2]Micro-CT观测半导体激光照射对牙移动的影响[D]. 谭荣.河北医科大学 2017
[3]弱激光照射对大鼠正畸移动牙牙周破骨细胞分化及PI3K/Akt通路影响的研究[D]. 孙娜.青岛大学 2015
本文编号：3597451
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