蒙药“地梢瓜”提取工艺优化与成分制备及抗氧化活性评价
发布时间：2022-01-21 09:21
实验目的:本论文旨在采用正交试验方法优化蒙药地梢瓜的不同溶剂提取工艺,体外评价提取物的抗氧化活性,并对其中的部分药物单体进行分离、纯化与鉴定。实验方法:通过单因素实验和正交设计,以总黄酮含量为指标,考察不同溶剂（水、乙醇）、溶剂浓度、提取时间、液料比和浸泡时间因素对地梢瓜提取效果的影响,优化提取工艺。通过地梢瓜提取物清除DPPH自由基的能力及对·OH、H2O2诱导的DNA氧化损伤的保护作用研究其体外抗氧化活性。先后以乙醇和水为溶剂,加热回流法提取,浓缩得到浸膏。将浸膏复溶于蒸馏水,使用石油醚、正丁醇及二氯甲烷依次萃取,并浓缩收集得到4个部位。依据高效液相图谱显示,对二氯甲烷部位和正丁醇部位,以大孔树脂、硅胶柱色谱、聚酰胺色谱硅胶制备板、HPLC等进行分离,得到单体化合物。通过MS、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR等波谱学方法鉴定化合物结构。实验结果:水提工艺实验中,总黄酮提取率影响因素为液料比>浸泡时间>提取时间,最佳提取条件为提取时间2h、液料比30:1、浸泡时间2h;醇提实验中,总黄酮提取率影响因素为乙醇浓度>液料比>浸泡时间>提取时间,最佳...
【文章来源】：中央民族大学北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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第二节实验方法??—、地梢瓜提取物清除ＤＰＰＨ自由基的能力??采用ＤＰＰＨ自由基清除模型，评价地梢瓜不同提取物的抗氧化能力。取％孔板，样品??孑匕中加入不同浓度的样品溶液ｌＯＯ＾Ｌ，然后加人１００｜ａＬ的２ｘｌ〇－７ｍｏｌ／ｍＬ的ＤＰＰＨ溶液；样??参孔中分别加人不同浓度的样品溶液１〇〇?ＰＬ、无水乙醇丨００?ｎＬ；对照孔屮加人ＤＰＰＨ溶液??１００?ＭＬ、蒸馏水１００?ｇＬ，混匀，室温避光静置反应３０?ｍｉｎ，于５１７?ｒｎｎ处测吸光值，以Ｖｃ??为对照，用半数抑制率ＩＣ５０表示抗氧化能力Ｉ５３，流程图如图３－１所示。??｜ｄｐｐｈ自由甚的淸除率＝［１?－?（Ａ．?—?士．）／叫ｘ?１〇〇％??９６孔板?丨?［９６？Ｌ板?丨?Ｌ?９６孔板?丨??＾?????＇??加入样品溶Ｓ?１００ＶＪＬ?｛加入样品溶夜１０〇ｍＬ?加入ＣＰＰＨ＃夜１００ｖｊＬ??，加入２ｘｉ〇７ｍ＞ｌ／ｒｒｔ?ＣＰＰＨ§５夜?１０〇ｊＬ?ｔ?加入跡乙酵?１００＾Ｌ?，加入蒸＿?１００ｌ－ｉＬ??ｉ?样品孔—?Ｌ?样参孔?１?［＿?对照孔?｜??Ｘ?１?，??混匀??室晶避光静置反应３０ｎｉｎ?５１７?ｎｎ＊Ｍ吸光值??图３－１清除ＤＰＰＨ自由基流程图??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ＤＰＰＨ?ｒａｄｉｃａｌ?ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ??２２??
其中，Ａ，为加入某浓度提取液反应液的吸光度，Ａｒ是该浓度提取液在测定波长的本底吸??光度，ＡＵ为阴性对照，即不加提取液时反应液的吸光度??二、地梢瓜提取物对？?０Ｈ诱导ＤＮＡ氧化损伤的保护作用??参考赵金莲等［５４）的方法，在％板中依次加人１叫ｌＯＯｎｇ／队ＤＮＡ、１０?０．１?ｍｏｌ／Ｌ??（ＮＨ４）２Ｆｅ（Ｓ０４）２?溶液、１０?ｐＬ?０．１７?ｍｏｌ／Ｌ?的?ＥＤＴＡ?二钠溶液、１０?叫?０．０１５?％Ｈ２０２?溶液、１０?ｐＬ??１０?ｉ耶／ｍＬ?Ｖｃ溶液、１０?ｐＬ不同浓度的水提总提物样品溶液＇?４０卟ＴＥ缓冲溶液，最后加??入０．５?ｐＬ?Ｇｏｌｄｖｉｅｗ染料，轻轻摇匀静置反应５?ｍｉｎ，以维生素Ｃ为对照，测其荧光强度（突??光测定条件为：在激发波长４８６?ｎｍ下扫描５００?－?６９５ｎｍ范围内的荧光光强度），流程图如??３－２所示，??９６孔板???—???Ｊ??１００ｎｇ／＾Ｌ?ＤＮＡ?ＩｐＬ??０．１?ｍｏｌ／Ｌ?（ＮＨ４）：Ｆｃ｛Ｓ０４）２?Ｈ）ｌｉＬ??０．１７ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ－＊ｔｌ＾?ｌＯｕＬ??Ｔ??？ＣＨ诱导ＤＮＡ氧化损伤破坏双链结构?＾?ＴＴ?＾??０．０１！＞％Ｈ：〇２?ｌＯｕＬ??加入对照品或样品修复双链结构?ｌＯｍｇｍＬＶｃｏｒ总提物样品溶液ｌ〇ｐＬ??ＴＩＥ缓冲溶液４０丨儿??Ｇｏｌｄｖｉｅｗ染料?０?５｜ｊＬ??摇匀静置５?ｍｍ测荧光强度??图３－２对＿ＯＨ诱导ＤＮＡ氧化损伤的保护的流程图??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｎ?ＤＮＡ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｄａｍａｇｅ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＯＨ??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]徐长卿正丁醇部位化学成分研究[J]. 邹传生,袁铭铭,吴西,曾顺,欧阳兰,周国平. 中药材. 2020(03)
[2]华北白前生物碱对小菜蛾生物活性的研究[J]. 石旺鹏,季荣. 中国植保导刊. 2017(01)
[3]地梢瓜苷对人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制[J]. 司艳红,商朝,祝云平,宋葆华,李卫红,商战平. 中成药. 2016(07)
[4]江苏地产白首乌C21甾体苷对高血脂大鼠的肝脏保护作用和抗氧化作用研究[J]. 王冬艳,华欣,叶记林,李芹,陈雁,季琰. 河北医药. 2016(03)
[5]耳叶牛皮消中C21甾类化学成分的分离与鉴定[J]. 郭娜,李晓鹏,许枬,韩伟健,林晓彤,徐晓雪. 沈阳药科大学学报. 2016(01)
[6]民族药材青阳参的化学成分研究[J]. 昝珂,过立农,郑健,马双成. 中国中药杂志. 2016(01)
[7]毛白前根茎化学成分的研究[J]. 崔波,郭夫江,李医明. 中成药. 2015(12)
[8]特色蒙药地梢瓜的研究概况[J]. 苏丽红,王晓琴,黄慧,杜月. 中国民族医药杂志. 2015(11)
[9]白首乌苷B抗结肠癌作用的研究[J]. 陈蒋丽,张玲,李艳芳,张如松,杨苏蓓. 中华中医药学刊. 2015(10)
[10]徐长卿逆转肿瘤多药耐药活性部位化学成分研究[J]. 褚文希,刘小红,刘坤,霍立娜,姚慧丽,高琪,高华,王威. 中草药. 2015(18)
硕士论文
[1]地梢瓜胚胎生物学研究[D]. 翟学婧.内蒙古农业大学 2018
[2]柳叶白前化学成分及其抗氧化活性研究[D]. 李婷婷.延边大学 2015
[3]西藏牛皮消的化学成分研究[D]. 饶丽丽.昆明理工大学 2014
[4]地梢瓜果实化学成分及三七中皂苷类成分的研究[D]. 王玎.沈阳药科大学 2007
本文编号：3600002
【文章来源】：中央民族大学北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－５野生地梢瓜??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｃｙｎａｎｃｈｕｔｎ?Ｔｈｅｓｉｏｉｄｅｓ?（Ｆｒｅｙｎ．）?Ｋ．?Ｓｃｈｕｍ??
第二节实验方法??—、地梢瓜提取物清除ＤＰＰＨ自由基的能力??采用ＤＰＰＨ自由基清除模型，评价地梢瓜不同提取物的抗氧化能力。取％孔板，样品??孑匕中加入不同浓度的样品溶液ｌＯＯ＾Ｌ，然后加人１００｜ａＬ的２ｘｌ〇－７ｍｏｌ／ｍＬ的ＤＰＰＨ溶液；样??参孔中分别加人不同浓度的样品溶液１〇〇?ＰＬ、无水乙醇丨００?ｎＬ；对照孔屮加人ＤＰＰＨ溶液??１００?ＭＬ、蒸馏水１００?ｇＬ，混匀，室温避光静置反应３０?ｍｉｎ，于５１７?ｒｎｎ处测吸光值，以Ｖｃ??为对照，用半数抑制率ＩＣ５０表示抗氧化能力Ｉ５３，流程图如图３－１所示。??｜ｄｐｐｈ自由甚的淸除率＝［１?－?（Ａ．?—?士．）／叫ｘ?１〇〇％??９６孔板?丨?［９６？Ｌ板?丨?Ｌ?９６孔板?丨??＾?????＇??加入样品溶Ｓ?１００ＶＪＬ?｛加入样品溶夜１０〇ｍＬ?加入ＣＰＰＨ＃夜１００ｖｊＬ??，加入２ｘｉ〇７ｍ＞ｌ／ｒｒｔ?ＣＰＰＨ§５夜?１０〇ｊＬ?ｔ?加入跡乙酵?１００＾Ｌ?，加入蒸＿?１００ｌ－ｉＬ??ｉ?样品孔—?Ｌ?样参孔?１?［＿?对照孔?｜??Ｘ?１?，??混匀??室晶避光静置反应３０ｎｉｎ?５１７?ｎｎ＊Ｍ吸光值??图３－１清除ＤＰＰＨ自由基流程图??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ＤＰＰＨ?ｒａｄｉｃａｌ?ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ??２２??
其中，Ａ，为加入某浓度提取液反应液的吸光度，Ａｒ是该浓度提取液在测定波长的本底吸??光度，ＡＵ为阴性对照，即不加提取液时反应液的吸光度??二、地梢瓜提取物对？?０Ｈ诱导ＤＮＡ氧化损伤的保护作用??参考赵金莲等［５４）的方法，在％板中依次加人１叫ｌＯＯｎｇ／队ＤＮＡ、１０?０．１?ｍｏｌ／Ｌ??（ＮＨ４）２Ｆｅ（Ｓ０４）２?溶液、１０?ｐＬ?０．１７?ｍｏｌ／Ｌ?的?ＥＤＴＡ?二钠溶液、１０?叫?０．０１５?％Ｈ２０２?溶液、１０?ｐＬ??１０?ｉ耶／ｍＬ?Ｖｃ溶液、１０?ｐＬ不同浓度的水提总提物样品溶液＇?４０卟ＴＥ缓冲溶液，最后加??入０．５?ｐＬ?Ｇｏｌｄｖｉｅｗ染料，轻轻摇匀静置反应５?ｍｉｎ，以维生素Ｃ为对照，测其荧光强度（突??光测定条件为：在激发波长４８６?ｎｍ下扫描５００?－?６９５ｎｍ范围内的荧光光强度），流程图如??３－２所示，??９６孔板???—???Ｊ??１００ｎｇ／＾Ｌ?ＤＮＡ?ＩｐＬ??０．１?ｍｏｌ／Ｌ?（ＮＨ４）：Ｆｃ｛Ｓ０４）２?Ｈ）ｌｉＬ??０．１７ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ－＊ｔｌ＾?ｌＯｕＬ??Ｔ??？ＣＨ诱导ＤＮＡ氧化损伤破坏双链结构?＾?ＴＴ?＾??０．０１！＞％Ｈ：〇２?ｌＯｕＬ??加入对照品或样品修复双链结构?ｌＯｍｇｍＬＶｃｏｒ总提物样品溶液ｌ〇ｐＬ??ＴＩＥ缓冲溶液４０丨儿??Ｇｏｌｄｖｉｅｗ染料?０?５｜ｊＬ??摇匀静置５?ｍｍ测荧光强度??图３－２对＿ＯＨ诱导ＤＮＡ氧化损伤的保护的流程图??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｎ?ＤＮＡ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｄａｍａｇｅ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＯＨ??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]徐长卿正丁醇部位化学成分研究[J]. 邹传生,袁铭铭,吴西,曾顺,欧阳兰,周国平. 中药材. 2020(03)
[2]华北白前生物碱对小菜蛾生物活性的研究[J]. 石旺鹏,季荣. 中国植保导刊. 2017(01)
[3]地梢瓜苷对人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制[J]. 司艳红,商朝,祝云平,宋葆华,李卫红,商战平. 中成药. 2016(07)
[4]江苏地产白首乌C21甾体苷对高血脂大鼠的肝脏保护作用和抗氧化作用研究[J]. 王冬艳,华欣,叶记林,李芹,陈雁,季琰. 河北医药. 2016(03)
[5]耳叶牛皮消中C21甾类化学成分的分离与鉴定[J]. 郭娜,李晓鹏,许枬,韩伟健,林晓彤,徐晓雪. 沈阳药科大学学报. 2016(01)
[6]民族药材青阳参的化学成分研究[J]. 昝珂,过立农,郑健,马双成. 中国中药杂志. 2016(01)
[7]毛白前根茎化学成分的研究[J]. 崔波,郭夫江,李医明. 中成药. 2015(12)
[8]特色蒙药地梢瓜的研究概况[J]. 苏丽红,王晓琴,黄慧,杜月. 中国民族医药杂志. 2015(11)
[9]白首乌苷B抗结肠癌作用的研究[J]. 陈蒋丽,张玲,李艳芳,张如松,杨苏蓓. 中华中医药学刊. 2015(10)
[10]徐长卿逆转肿瘤多药耐药活性部位化学成分研究[J]. 褚文希,刘小红,刘坤,霍立娜,姚慧丽,高琪,高华,王威. 中草药. 2015(18)
硕士论文
[1]地梢瓜胚胎生物学研究[D]. 翟学婧.内蒙古农业大学 2018
[2]柳叶白前化学成分及其抗氧化活性研究[D]. 李婷婷.延边大学 2015
[3]西藏牛皮消的化学成分研究[D]. 饶丽丽.昆明理工大学 2014
[4]地梢瓜果实化学成分及三七中皂苷类成分的研究[D]. 王玎.沈阳药科大学 2007
本文编号：3600002
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