SFRP5通过调控白癜风中Wnt/β-catenin信号通路的活性抑制黑色素细胞的黑素合成

发布时间：2022-01-21 12:59

　　目的:分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）在调节组织器官分化和发育中发挥着重要作用,但是其对白癜风的影响尚不清楚,本研究旨在探讨SFRP5对黑色素细胞黑素合成的影响,并阐明其具体机理,进一步探索其在白癜风发生发展中的作用。方法:首先我们通过免疫组织化学、q RT-PCR和Western blot检测SFRP5在白癜风组织和白癜风黑色素细胞中的表达。然后,利用重组SFRP5腺病毒（Ad SFRP5）感染正常表皮黑色素细胞（PIG1）,并利用重组si SFRP5腺病毒（Adsi SFRP5）感染白癜风黑色素细胞（PIG3V）,测定酪氨酸酶活性和黑色素含量。通过免疫细胞化学染色、透射电镜、扫描电镜、q RT-PCR和Western blot对黑素合成和黑素合成相关蛋白的表达水平进行了分析。利用Western blot和免疫细胞化学实验检测SFRP5对黑色素细胞中Wnt/β-catenin信号通路的影响。最后,通过Western blot研究了β-catenin激动剂SKL2001对SFRP5抑制黑素合成的逆转作用。结果:首先,我们发现SFRP5在白癜风皮损中高表达,与PIG1细胞相比,SFRP... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

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SFRP5在白癜风皮损中表达上调Figure1.1SFRP5wasupregulatedinvitiligotissues

重庆医科大学硕士研究生学位论文16图1.2SFRP5在PIG3V细胞中表达上调Figure1.2SFRP5isupregulatedinPIG3VcelllinesA：SFRP5在PIG1细胞和PIG3V细胞中mRNA水平的表达；B：Westernblot分析SFRP5在PIG1细胞和PIG3V细胞中的表达量。**P<0.01。A：ThemRNAlevelsofSFRP5inPIG1andPIG3V;B:TheproteinlevelsofSFRP5inPIG1andPIG3VweremeasuredbyWesternblotanalysis.**P<0.01.3讨论由于白癜风发病机制复杂，治疗也十分棘手，一直是近年来皮肤学界研究的重点和难点。尽管白癜风的发病涉及多重机制，但是遗传因素和非遗传因素导致的免疫介导的黑色素细胞功能和存活异常仍是学术界普遍接受的假说[22,23]。Wnt信号通路在调节黑色素细胞的增殖、分化、生长及黑素合成等过程中起着十分重要的作用[13]。SFRP5作为Wnt信号通路的调节剂，在白癜风等色素性疾病中的作用也受到了一定关注。本课题组前期的研究发现：SFRP5能通过Wnt信号通路抑制黑色素瘤细胞的迁移与侵袭[24]，近年来，诸多权威论据均表明白癜风与恶性黑色素瘤之间存在着负相关性[25-27]。因此我们也将研究的视角从恶性黑色素瘤转移到了白癜风。本研究中我们首先利用免疫组织化学实验、qRT-PCR和Westenblot分析检测了SFRP5在白癜风皮损组织和正常皮肤组织，白癜风黑色素细胞和正常黑色素细胞中的差异表达。结果表明，SFRP5在白癜风皮损组织和白癜风黑色素细胞中的表达均增高。这些结果提示，SFRP5可能在白癜风的发生发展中扮演着重要角色。因此，下一步我们将具体探讨SFRP5对黑色素细胞生物学功能的影响及其潜在机理。

重庆医科大学硕士研究生学位论文22Reverse：GCCATCACCCCAGGAGACAATRP2Forward：GGAGTGGTCCCTACATCCTACGReverse：GAATGGATGTTCTGCCGAATCTYRForward：GACAAATCCAGAACCCCAAGGReverse：GAGGCATCCGCTATCCCAGT1.4.12蛋白提取及Westernblot同第一部分。1.5统计学分析同第一部分。2结果2.1SFRP5对黑色素细胞的增殖和凋亡没有明显影响为了研究SFRP5对黑素合成调节的作用，我们分别用AdSFRP5和AdRFP感染PIG1细胞，AdsiSFRP5和AdGFP感染PIG3V细胞。Westernblot结果显示，AdSFRP5能使PIG1细胞中的SFRP5水平明显增高，同样的，AdsiSFRP5能使PIG3V细胞中SFRP5的表达水平明显下调（图2.1A）。CCK-8结果显示，过表达SFRP5并不影响PIG1细胞的增殖活性，SFRP5下调也不影响PIG3V细胞的增殖活性（图2.1B）；此外，流式细胞术结果显示，过表达SFRP5对PIG1细胞的凋亡无明显影响，而且SFRP5下调也不影响PIG3V细胞的凋亡（图2.1C）。图2.1SFRP5对黑色素细胞增殖和凋亡的影响

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3600307