复方独正汤对类风湿关节炎破骨细胞分化的抑制作用和相关机制初探

发布时间：2022-02-14 19:18

　　目的:观察复方独正汤提取物对破骨细胞（Osteoclast,OC）前体细胞-小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导的OC分化、增殖的影响,初探其可能的机制,进一步为临床治疗类风湿关节炎提供实验研究依据。方法:取对数生长期的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,用细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8法）检测24h、48h、72h、96h、120h时复方独正汤提取物（50,100,200μg/ml）对RAW264.7增殖的影响;用不同浓度（6.25,12.5,25,50,100ng/ml）核因子κB受体活化因子配体（Receptor Activator of Nuclear Factor-κB Ligand,RANKL）对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7进行诱导培养,5天后观察其形态变化并用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色鉴定OC;将OC分为对照组（RAW264.7细胞）、模型组（RAW264.7细胞+50ng/ml RANKL）、药物高、中、低治疗组（RAW264.7细胞+50ng/ml RANKL+药物）进行培养,用T... 

【文章来源】：湖北民族大学湖北省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

复方独正汤水提物对RAW264.7细胞生存率的影响

将对照组与含6.25ng/ml,12.5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml,100ng/ml RANKL诱导剂各组培养5天,按TRAP染色试剂盒说明书进行染色。有3个及以上细胞核且TRAP染色阳性为OC。100倍光镜下随机选10个视野,计数OC数量,每孔重复计数3次,取其均数,用个/10个视野表示。TRAP染色后,可见对照组细胞的形状、体积无明显变化,且多为单核细胞,未见OC生成;各RANKL诱导剂组均可见体积变大,多核的OC生成,即RAW264.7细胞经RANKL诱导分化形成OC,见图1-2。与对照组相比,各诱导剂组均有OC的形成,诱导剂各组组间OC体积大小、数量多少不等,本实验需诱导出大量的OC来进行后续之实验,而100ng/ml和50ng/ml RANKL组所诱导出的巨型细胞大小、数量明显大于25ng/ml,12.5ng/ml,6.25ng/ml RANKL组,且诱导出的OC与RANKL诱导剂浓度成正相关,统计发现100ng/ml和50ng/ml RANKL两组所诱导出的OC数量几乎等同,无统计意义(P>0.05),后续之实验以50ng/ml RANKL来诱导分化OC,见图1-3。图1-3 RANKL浓度对OC数量的影响

RANKL浓度对OC数量的影响

【参考文献】：
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博士论文
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本文编号：3625122