EV-D68 VP1亚单位疫苗和多肽疫苗的免疫原性及保护性研究

发布时间：2022-07-29 12:16

　　目的:通过生物信息学技术分析肠道病毒D68型（EV-D68）的衣壳蛋白VP1的特性,并筛选出4个VP1蛋白最可能的B细胞表位,合成肽段,构建EV-D68多肽疫苗。通过原核表达系统诱导表达重组VP1蛋白,运用镍离子金属鳌合亲和层析的方法纯化目的蛋白,构建病毒亚单位疫苗。将以上两种疫苗免疫小鼠,检测特异性抗体的产生和中和抗体的作用,比较两种疫苗的免疫保护效果。方法:应用Bioedit、ExPASy、ProtParam等多种生物信息学工具,对EV-D68 VP1蛋白的理化性质、结构功能和B细胞表位进行预测,并对B细胞表位肽段进行筛选,合成筛选出的肽段并偶联KLH蛋白,PBS溶解后与等量氢氧化铝佐剂混合,制备成多肽疫苗。应用PCR技术扩增EV-D68的VP1基因,并克隆到原核表达载体pET28a（+）上,构建重组质粒pET28a（+）-VP1。重组质粒经双酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG诱导表达蛋白。表达的目的蛋白用镍离子金属鳌合亲和层析的方法纯化,浓缩后的蛋白溶液与等量氢氧化铝佐剂混合,制备成亚单位疫苗。将多肽疫苗和亚单位疫苗分别腹腔注射免疫小鼠,检测血清中抗体的... 

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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英文摘要
前言
第一部分 EV-D68 VP1 蛋白的生物信息学分析和B细胞表位预测
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
        2.1 VP1理化性质预测
        2.2 VP1结构功能预测
        2.3 B细胞表位
    3 讨论
第二部分 VP1蛋白的表达和纯化
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
        2.1 目的基因VP1的扩增
        2.2 重组质粒pET28a(+)-VP1 的双酶切鉴定
        2.3 重组质粒pET28a(+)-VP1 的测序结果
        2.4 目的蛋白的表达纯化
        2.5 纯化产物的WB鉴定
    3 讨论
第三部分 亚单位疫苗和多肽疫苗的保护性研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
        2.1 WB检测EV-D68特异性抗体的产生
        2.2 ELISA检测抗体效价
        2.3 微量中和试验
    3 讨论
全文总结
文献综述
参考文献
致谢
硕士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]人肠道病毒71型抗原表位的研究进展[J]. 祝苗,张添方,高柳莺,董长征.  中国细胞生物学学报. 2017(09)
[2]结核潜伏感染蛋白Rv2657c T细胞和B细胞表位的预测与分析[J]. 杨丹,白雪娟,阳幼荣,林明贵,吴雪琼.  实用医学杂志. 2017(01)
[3]肠道病毒71型六安地区分离株VP1基因的生物信息学分析及B细胞表位预测[J]. 俞海洋,陈伟,倪德群,常宏伟,王林定,汤仁树,陈灵芝,丁晓娟,陈敬贤,王明丽.  安徽医科大学学报. 2012(03)



本文编号：3666450