SIRT6抑制剂，OSS 1 28167对HBV复制的影响及机制研究

发布时间：2022-10-10 20:27

　　背景:乙型肝炎病毒感染是严重的公共卫生问题。据估计,全球慢性HBV感染者约有2.57亿,而中国的慢性HBV感染者约有8600万。慢性HBV感染严重危害人类健康,可逐渐发展为肝炎、肝硬化和肝癌,每年因HBV感染导致的各种终末期疾病死亡约88.7万。目前,临床上用于治疗慢性HBV感染的药物主要分为核苷（酸）类似物和干扰素,然而这两种药物均不能完全清除HBV。因此,研发一种新型抗HBV药物至关重要。我们通过筛查小分子化合物库,发现SIRT6抑制剂OSS₂8167可有效地抑制HBV的复制。本研究利用HBV稳定表达细胞系Hep G2.2.15细胞、HBV感染细胞模型Hep G2-NTCP细胞及HBV转基因小鼠模型全面系统研究了OSS₂8167对HBV复制的影响,并进一步阐明了其发挥抗病毒作用的分子机制。目的:1.在Hep G2.2.15和Hep G2-NTCP细胞中研究SIRT6抑制剂OSS₁28167对HBV复制的影响。2.在HBV转基因小鼠模型中研究OSS₁28167的抗病毒作用。3.阐明OSS_... 

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中文摘要
英文摘要
前言
    参考文献
第一部分 体外验证SIRT6 抑制剂,OSS_128167对HBV复制的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞
            1.1.2 小分子化合物、质粒和抗体
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要仪器设备
            1.1.5 主要试剂配制
        1.2 方法
            1.2.1 细胞培养
            1.2.2 MTS实验分析OSS_128167在HepG2.2.15和HepG2-NTCP细胞中的半数细胞毒性浓度(CC50)
            1.2.3 HBV core DNA的提取及检测(real-time PCR)
            1.2.4 Southern blot
            1.2.5 RNA的提取及检测
            1.2.6 ELISA检测HBsAg的分泌
            1.2.7 ELISA检测HBeAg的分泌
            1.2.8 Western blot
            1.2.9 分析OSS_128167对HepG2.2.15和已感染HBV的HepG2-NTCP细胞中HBV复制的影响
    2 结果
        2.1 OSS_128167在HepG2.2.15和HepG2-NTCP细胞中的半数细胞毒性浓度(CC50)大于400μM
        2.2 OSS_128167 可降低HepG2.2.15 和已感染HBV的 HepG2-NTCP细胞中HBV的复制水平
        2.3 OSS_128167 可降低HepG2.2.15 和已感染HBV的 HepG2-NTCP细胞中HBV3.5-kb RNA的水平
        2.4 OSS_128167 可降低HepG2.2.15 和已感染HBV的 HepG2-NTCP细胞中HBV蛋白的表达
    3 讨论
    参考文献
第二部分 体内验证SIRT6 抑制剂,OSS_128167 的抗病毒作用
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 动物
            1.1.2 抗体
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要仪器设备
        1.2 方法
            1.2.1 HBV转基因小鼠实验流程
            1.2.2 小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)水平的检测
            1.2.3 小鼠血清中HBV DNA的提取与检测
            1.2.4 小鼠血清中HBsAg和 HBeAg水平的检测
            1.2.5 小鼠肝脏中HBV DNA的提取与检测
            1.2.6 小鼠肝脏中HBV RNAs的提取与检测
            1.2.7 免疫组化小鼠肝脏中HBc蛋白质水平的检测
    2 结果
        2.1 OSS_128167 处理不影响HBV转基因小鼠血清中ALT的水平
        2.2 OSS_128167 处理后,HBV转基因小鼠血清中病毒复制的指标呈时间依赖性降低
        2.3 OSS_128167 处理可降低HBV转基因小鼠肝组织中病毒复制的指标
    3 讨论
    参考文献
第三部分 SIRT6 抑制剂,OSS_128167 调控HBV转录和复制的分子机制研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞
            1.1.2 质粒和抗体
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要仪器设备
        1.2 方法
            1.2.1 验证SIRT6沉默水平
            1.2.2 分析SIRT6 沉默对HBV转录和复制的影响
            1.2.3 分析OSS_128167 是否通过调控SIRT6 影响HBV的转录和复制
            1.2.4 cccDNA的提取及检测
            1.2.5 免疫荧光技术检测SIRT6 沉默对HBc蛋白质水平的影响
            1.2.6 双荧光素酶报告系统检测SIRT6对HBV启动子活性的影响
            1.2.7 分析SIRT6对HBV Cp活性相关的转录因子表达的影响
            1.2.8 分析SIRT6 沉默对PPARα表达水平的影响
            1.2.9 分析OSS_128167对PPARα表达水平的影响
            1.2.10 检测PPARα沉默对HBV核心启动子活性的影响
            1.2.11 检测PPARα沉默对HBV转录和复制的影响
            1.2.12 分析PPARα是否参与了SIRT6促HBV复制的过程
            1.2.13 分析SIRT6和PPARα是否参与了OSS_128167 的抗HBV过程
    2 结果
        2.1 SIRT6 沉默可抑制HBV的转录和复制
        2.2 OSS_128167 通过调控SIRT6 抑制HBV的转录和复制
        2.3 SIRT6 过表达显著增强HBV Cp的转录活性
        2.4 SIRT6 过表达上调转录因子PPARα的表达
        2.5 OSS_128167 处理下调PPARα的表达
        2.6 PPARα沉默可抑制HBV的转录和复制
        2.7 SIRT6和PPARα参与了OSS_128167 的抗HBV过程
    3 讨论
    参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷.  中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]靶向HBV共价闭合环状DNA的治疗策略[J]. 李强,卓其斌,黄玉仙,陈良.  临床肝胆病杂志. 2015(09)



本文编号：3690299