火绒草提取物抗炎及神经保护作用机制研究
发布时间：2023-05-20 03:31
火绒草是一种广泛应用于民间治疗咳嗽、肾炎、尿道炎等炎症疾病的中草药,为深入研究火绒草抗炎作用,本课题首先用MTT实验及一氧化氮(NO)实验对火绒草提取物细胞毒性及抗炎活性进行初筛,筛选得到抗炎活性高且细胞毒性小的火绒草提取物ent-kaur-15-en-17-al-18-oicacid(LL-3),课题进一步探究其抗炎作用及机制,实验结果发现LL-3通过减少氧化性物质活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)生成,提高还原性物质谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)活力减少氧化应激的产生。RT-PCR实验结果发现LL-3能显著降低环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤死亡受体因子-α(TNF-α)促炎介质及因子过表达,为进一步探究其信号通路,Western blot实验检测P38、p-P38、NF-κB蛋白表达情况,实验结果显示LL-3显著降低p-P38、NF-κB蛋白表达,以上实验结果表明LL-3可通过抑制LPS诱导的RAW264.7氧化应激,阻滞P38/MAPK、NF-κB信号通路激活从而降低COX-2、iNOS、TNF-α基因转录达到抗炎的目的。线粒体是产...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略语词汇表
第一章 绪论
1.1 慢性炎症
1.2 慢性炎症机制
1.2.1 氧化应激
1.2.2 炎症信号通路
1.3 阿尔兹海默症
1.4 AD发病机制
1.4.1 Aβ蛋白级联学说
1.4.2 氧化应激学说
1.4.3 炎症因子学说
1.4.4 线粒体功能障碍学说
1.4.5 细胞凋亡学说
1.5 火绒草
第二章 火绒草提取物抗炎作用机制研究
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 化合物
2.1.3 试剂
2.1.4 试剂配制
2.1.5 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞复苏、培养及冻存
2.2.2 MTT法检测火绒草提取物细胞毒性
2.2.3 Giress Regant法初筛火绒草提取物抗炎活性
2.2.4 ROS实验
2.2.5 GSH实验
2.2.6 MDA实验
2.2.7 SOD实验
2.2.8 MMP检测
2.2.9 RNA的提取与Real-time PCR
2.2.10 Western Blot实验
2.3 实验结果
2.3.1 火绒草提取物细胞毒性
2.3.2 火绒草提取物降低LPS诱导的RAW264.7细胞内NO含量
2.3.3 LL-3升高LPS诱导的RAW264.7细胞MMP降低
2.3.4 LL-3降低LPS诱导的RAW264.7细胞ROS水平
2.3.5 LL-3降低LPS诱导的RAW264.7细胞内MDA水平、升高SOD及GSH的水平
2.3.6 LL-3降低LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS、COX-2、TNF-α过表达
2.3.7 LL-3阻滞LPS诱导的RAW264.7细胞P38/MAPK、NF-κB通路
2.4 讨论
第三章 化合物LL-3神经保护作用机制研究
3.1 实验材料
3.1.1 细胞株
3.1.2 化合物
3.1.3 试剂
3.1.4 试剂配制
3.1.5 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 细胞复苏、培养及冻存
3.2.2 MTT法检测化合物LL-3细胞毒性
3.2.3 MTT法检测化合物LL-3神经保护作用
3.2.4 ROS实验
3.2.5 GSH实验
3.2.6 MDA实验
3.2.7 SOD实验
3.2.8 细胞凋亡检测
3.2.9 DAPI染色
3.2.10 Western Blot实验
3.3 实验结果
3.3.1 LL-3细胞毒性及减弱Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞毒性
3.3.2 LL-3降低Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞内ROS水平
3.3.3 LL-3降低Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞内MDA水平、升高SOD及GSH的水平
3.3.4 LL-3升高Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞MMP降低
3.3.5 LL-3削弱Aβ25-35蛋白诱导的SH-SY5Y细胞凋亡
3.3.6 LL-3阻滞Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞p53及NF-κB信号通路
3.3.7 LL-3调节Aβ25-35诱导的Bax、Cytoc、Cleaved-caspase 3、bcl-2蛋白表达
3.4 讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3820455
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第一章 绪论
1.1 慢性炎症
1.2 慢性炎症机制
1.2.1 氧化应激
1.2.2 炎症信号通路
1.3 阿尔兹海默症
1.4 AD发病机制
1.4.1 Aβ蛋白级联学说
1.4.2 氧化应激学说
1.4.3 炎症因子学说
1.4.4 线粒体功能障碍学说
1.4.5 细胞凋亡学说
1.5 火绒草
第二章 火绒草提取物抗炎作用机制研究
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 化合物
2.1.3 试剂
2.1.4 试剂配制
2.1.5 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞复苏、培养及冻存
2.2.2 MTT法检测火绒草提取物细胞毒性
2.2.3 Giress Regant法初筛火绒草提取物抗炎活性
2.2.4 ROS实验
2.2.5 GSH实验
2.2.6 MDA实验
2.2.7 SOD实验
2.2.8 MMP检测
2.2.9 RNA的提取与Real-time PCR
2.2.10 Western Blot实验
2.3 实验结果
2.3.1 火绒草提取物细胞毒性
2.3.2 火绒草提取物降低LPS诱导的RAW264.7细胞内NO含量
2.3.3 LL-3升高LPS诱导的RAW264.7细胞MMP降低
2.3.4 LL-3降低LPS诱导的RAW264.7细胞ROS水平
2.3.5 LL-3降低LPS诱导的RAW264.7细胞内MDA水平、升高SOD及GSH的水平
2.3.6 LL-3降低LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS、COX-2、TNF-α过表达
2.3.7 LL-3阻滞LPS诱导的RAW264.7细胞P38/MAPK、NF-κB通路
2.4 讨论
第三章 化合物LL-3神经保护作用机制研究
3.1 实验材料
3.1.1 细胞株
3.1.2 化合物
3.1.3 试剂
3.1.4 试剂配制
3.1.5 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 细胞复苏、培养及冻存
3.2.2 MTT法检测化合物LL-3细胞毒性
3.2.3 MTT法检测化合物LL-3神经保护作用
3.2.4 ROS实验
3.2.5 GSH实验
3.2.6 MDA实验
3.2.7 SOD实验
3.2.8 细胞凋亡检测
3.2.9 DAPI染色
3.2.10 Western Blot实验
3.3 实验结果
3.3.1 LL-3细胞毒性及减弱Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞毒性
3.3.2 LL-3降低Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞内ROS水平
3.3.3 LL-3降低Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞内MDA水平、升高SOD及GSH的水平
3.3.4 LL-3升高Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞MMP降低
3.3.5 LL-3削弱Aβ25-35蛋白诱导的SH-SY5Y细胞凋亡
3.3.6 LL-3阻滞Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞p53及NF-κB信号通路
3.3.7 LL-3调节Aβ25-35诱导的Bax、Cytoc、Cleaved-caspase 3、bcl-2蛋白表达
3.4 讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
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本文编号：3820455
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3820455.html
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