肠系膜淋巴管结扎对阳明腑实证大鼠肺损伤的影响及中药的干预效应

发布时间：2017-05-23 21:13

  本文关键词：肠系膜淋巴管结扎对阳明腑实证大鼠肺损伤的影响及中药的干预效应，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： (1)观察肠系膜淋巴管结扎对阳明腑实证大鼠肺损伤的影响；(2)探讨中药对阳明腑实证大鼠肺损伤的影响。 (3)肠系膜淋巴管结扎及中药对阳明腑实证大鼠肺损伤影响的机制研究。方法：(1)雄性SD(Sprage-Dawley)大鼠,随机分为：生理盐水组、生理盐水+肠淋巴管结扎组、阳明腑实证模型组、阳明腑实证+肠淋巴管结扎组。经大鼠胆胰管缓慢注入3.5%的无菌牛磺胆酸钠制作大鼠重症急性胰腺炎阳明腑实证模型；分离并结扎肠系膜淋巴管制备生理盐水+肠淋巴管结扎组及阳明腑实证+肠淋巴管结扎组；模型成功后,分别于6h、12h、24h不同时间点,采集大鼠门静脉血及腹主动脉血,并分离血浆及血清,采集大鼠肺组织,部分用于制备组织匀浆,部分用于病理组织学检测。采用偶氮基质显色鲎试验定量法,检测大鼠血浆内毒素(Endotoxia, ET)的水平；采用Griess法,检测大鼠血清一氧化氮(Nitric oxid, NO)的水平；采用酶联免疫分析法(ELISA),检测大鼠血清及肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-a(Tumor necrotic factor-a, TNF-α)、白细胞介素-1 (Interleukin-1, IL-1)的水平；采用髓过氧化物酶法,检测肺组织匀浆中髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的活性；采用超氧化物歧化酶法,检测肺组织匀浆中的超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)的水平。光镜下观察肺病理组织学改变。(2)雄性SD大鼠,随机分为：生理盐水组、阳明腑实证模型组及阳明腑实证+大黄游离蒽醌组；阳明腑实证+大黄游离蒽醌组于造模前12h及造模后2h以大黄游离蒽醌(72mg/kg)2ml灌胃制备给药组；各组大鼠分别于术后6h、12h和24h处死大鼠,采集大鼠动脉及静脉血,和大鼠肺组织,肺组织部分用于制备组织匀浆,部分用于包埋、切片及HE染色,检测方法及指标同方法(1)。(3)雄性SD大鼠,随机分为：生理盐水组、阳明腑实证模型组、阳明腑实证+肠淋巴管结扎组及阳明腑实证+大黄游离蒽醌组；术后24h处死大鼠,采集大鼠肺组织,部分常规石蜡包埋制备切片,采用免疫组织化学法检测肺组织核转录因子(Nuclear factor kB, NF-kB)和细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)蛋白的表达。部分-80℃保存用于逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测肺组织中一氧化氮合成酶(Inducible Nitric Oxide Synthase, iNOS) mRNA和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,, TLR4) mRNA的表达。结果：(1)门静脉血：与阳明腑实证模型组相较,阳明腑实证+肠淋巴管结扎组血浆ET水平显著降低(P0.05),12、24h时,血清NO、TNF-α及IL-1水平下降显著(P0.01)；阳明腑实证+大黄游离蒽醌组12、24h时血浆ET水平及6h血清NO水平下降明显(P0.05)；血清TNF-α及IL-1水平下降显著(P0.01)。(2)动脉血：与阳明腑实证模型组相较,阳明腑实证+肠淋巴管结扎组血浆ET水平显著降低(P0.05)；12、24h时血清IL-1及血清NO及TNF-α水平显著下降(P0.01)。阳明腑实证+大黄游离蒽醌组血浆ET、6h时血清IL-1水平降低明显(P0.05)；12、24h时血清IL-1、血清NO及TNF-α水平显著下降(P0.01)。(3)肺组织匀浆：与阳明腑实证模型组相较,阳明腑实证+肠淋巴管结扎组,12、24h时肺组织匀浆TNF-α及IL-1水平,6、12h时MPO水平显著降低(P0.01),SOD水平显著升高(P0.05)。阳明腑实证+大黄游离蒽醌组肺组织匀浆中TNF-α、IL-1及MPO水平显著降低(P0.01),12h时SOD水平显著升高(P0.05)。光镜下观察大鼠肺组织病理组织学改变,与阳明腑实证模型组相较,阳明腑实证+肠淋巴管结扎组及阳明腑实证+大黄游离蒽醌组大鼠肺组织损伤均有所改善,炎性渗出有所减轻。(4)机制研究：免疫组织化学检测显示,阳明腑实证模型组,大鼠肺组织NF-κB和ICAM-1的蛋白表达均上调；经肠淋巴管结扎及大黄游离蒽醌干预后NF-κB和ICAM-1的蛋白表达均下调。RT-PCR显示,阳明腑实证模型组,iNOSmRNA及TLR4 mRNA均有表达；经肠淋巴管结扎和大黄游离蒽醌干预后,iNOSmRNA及TLR4 mRNA表达均出现下调。结论：(1)通过结扎肠系膜淋巴管,可减轻阳明腑实证大鼠内毒素移位及NO、TNF-α、IL-1炎症介质释放；降低中性粒细胞,从而使MPO水平降低,减轻炎症损伤程度；提高SOD以清除氧自由基,减轻氧化应激损伤程度；并对大鼠肺组织病理学损伤具保护作用。(2)大黄游离蒽醌的干预可抑制阳明腑实证大鼠内毒素移位,减轻内毒素移位所致的各种炎性反应,抑制MO、 TNF-α、IL-1等炎症介质的释放；降低MPO水平,以减轻中性粒细胞滞留程度,提高SOD活性以减轻氧化损伤,从而减轻炎症损伤程度；保护阳明腑实证大鼠所致的肺组织等多器官功能损伤。(3)肠淋巴管结扎和大黄游离蒽醌对阳明腑实证大鼠所致肺损伤的干预可显著降低NF-κB和ICAM-1的表达,抑制iNOSmRNA及TLR4 mRNA的表达。NF-κB是调控ICAM-1和iNOS等的重要核转录因子,因此肠淋巴管结扎和大黄游离蒽醌对阳明腑实证大鼠肺损伤的影响机制可能是通过NF-κB途径实现的。
【关键词】：肠系膜淋巴管 结扎 阳明腑实证 大黄游离蒽醌 肺损伤
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要3-7
• Abstract7-12
• 前言12-14
• 第一部分 肠淋巴管结扎对阳明腑实证大鼠肺损伤的影响14-35
• 材料与方法14-20
• 结果20-28
• 讨论28-34
• 结论34-35
• 第二部分 中药对阳明腑实证大鼠肺损伤的影响35-46
• 材料与方法35-36
• 结果36-43
• 讨论43-45
• 结论45-46
• 第三部分 肠淋巴管结扎及中药对阳明腑实证大鼠肺损伤影响的机制研究46-61
• 材料与方法46-52
• 结果52-57
• 讨论57-60
• 结论60-61
• 问题与展望61-62
• 参考文献62-70
• 英汉缩略词对照表70-71
• 致谢71-72
• 肠淋巴系统在急性胰腺炎中的研究进展(综述)72-89
• 参考文献81-89

【参考文献】

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本文编号：389151