新型抗肿瘤五环三萜类化合物的筛

发布时间：2017-05-25 03:10

  本文关键词：新型抗肿瘤五环三萜类化合物的筛选、相关分子机制探讨及载药PLGA纳米粒的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:五环三萜类化合物存在于香料、水果、种子、蔬菜和草药等植物中,具有广泛的生物活性,如抗急、慢性炎症,抑制肿瘤细胞增生,诱导凋亡,抗血管生成和抗肿瘤侵袭等。PLGA由单体乳酸和羟基乙酸随机聚合而成,有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能。此外,PLGA是一种可降解的功能高分子有机化合物,PLGA共聚物通过水解乳酸和羟基乙酸间的酯键而降解,这些单体容易通过体内三羧酸循环分解为二氧化碳和水而代谢掉。PLGA已通过美国FDA认证,被正式作为药用辅料收录进美国药典,广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。随着纳米技术的不断发展,PLGA可制备成各种类型的聚合物,如微球、微胶囊、纳米颗粒等,携带疫苗、多肽、蛋白质和小分子药物,应用于纳米药物传输系统中。目的:筛选新合成的五环三萜类化合物的抗肿瘤活性;分析抗肿瘤活性最高的WZW-50诱导不同肿瘤细胞凋亡和阻遏细胞周期的的分子机制;优化载药PLGA纳米粒的制备方法,获得高包封率的载药纳米粒;对纳米粒的形态特征进行表征,并检测其对肿瘤细胞生长抑制情况。方法:1.MTT法筛选具有抗肿瘤活性的新型五环三萜类化合物。2.流式细胞仪检测细胞凋亡率。3.Western blotting检测细胞周期、凋亡相关通路蛋白。4.利用纳米沉淀法制备载药WZW-50 PLGA纳米粒;利用马尔文粒度测定仪检测纳米粒粒径及Zeta电位。5.利用TEM检测PLGA纳米粒子的形态。6.利用HPLC法绘制WZW-50的标准曲线并计算载药WZW-50 PLGA纳米粒的包封率。7.荧光显微镜检测载有香豆素-6的PLGA纳米粒的细胞摄取情况。结果:1.新型五环三萜类化合物对不同肿瘤细胞存活率有一定影响,其中WZW-50的活性最高。WZW-50对Hela细胞的抑制作用呈浓度、时间依赖性。2.流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:WZW-50可诱导MCF-7和Hela细胞凋亡。10μM药物诱导MCF-7和Hela的凋亡率分别为19.88%和14.01%。3.由Western blotting结果可推断WZW-50可能通过线粒体凋亡通路引起细胞凋亡;WZW-50阻遏细胞周期G1/S的进程。4.成功制备了PLGA载药纳米粒,PLGA纳米粒粒径为106±1.27 nm,Zeta电位-14.7±0.76 m V。5.TEM显示载药WZW-50 PLGA纳米粒为形态均一的圆形粒子。6.HPLC法测得载药WZW-50 PLGA纳米粒的包封率为72.12±5.68%。7.荧光显微镜检测结果表明:载有香豆素-6的PLGA纳米粒能够高效导入Hela和MCF-7细胞中。8.载药PLGA纳米粒对Hela和MCF-7细胞具有明显的抑制效果。结论:五环三萜类衍生物WZW-50能有效地抑制不同肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。Western blotting结果表明:WZW-50可能通过线粒体凋亡通路引起细胞凋亡;WZW-50能阻遏细胞周期G1/S的进程;平均粒径为106±1.27 nm的PLGA载药纳米粒可以有效导入肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞生长。
【关键词】：五环三萜 抗肿瘤 PLGA纳米粒
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-19
• 1. 材料14-16
• 1.1 细胞14
• 1.2 仪器与试剂14-16
• 2. 实验方法16-19
• 2.1 新型抗肿瘤五环三萜化合物筛选及作用机理分析16-17
• 2.1.1 新型抗肿瘤五环三萜化合物的筛选16
• 2.1.2 细胞凋亡检测16
• 2.1.3 Western Blotting分析周期凋亡相关蛋白16-17
• 2.2 PLGA纳米粒的构建、表征及效应分析17-19
• 2.2.1 PLGA纳米粒制备17
• 2.2.2 粒径、Zeta电位检测17
• 2.2.3 透射电镜观察纳米粒形态17-18
• 2.2.4 HPLC法测载WZW-50 PLGA纳米粒包封率18
• 2.2.5 荧光显微镜观察肿瘤细胞摄取纳米粒18
• 2.2.6 载药纳米粒对细胞存活率的影响18-19
• 实验结果19-26
• 1. 抗肿瘤五环三萜类化合物的筛选及作用机理19-23
• 1.1 五环三萜化合物的MTT结果19-21
• 1.2 流式细胞仪对细胞凋亡的检测21-22
• 1.3 Western Blotting分析周期相关蛋白22-23
• 2. PLGA纳米粒的构建、表征及效应分析23-26
• 2.1 PLGA纳米粒的粒径、Zeta电位检测23
• 2.2 PLGA纳米粒的透射电镜形态分析23-24
• 2.3 载WZW-50的PLGA纳米粒的包封率24
• 2.4 荧光显微镜检测纳米粒导入细胞24-25
• 2.5 载WZW-50 PLGA纳米粒对肿瘤细胞存活率影响25-26
• 讨论26-28
• 结论28-29
• 参考文献29-33
• 综述33-43
• 参考文献38-43
• 附录43-45
• 创新点43-44
• 英文缩写44-45
• 致谢45-46

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本文编号：392584