荞麦胰蛋白酶抑制剂α-螺旋区氨基酸对抗肿瘤活性的影响

发布时间：2024-03-11 21:19

　　线粒体虽拥有自身的遗传物质及遗传体系,但超过99%线粒体蛋白仍由核基因编码,这些蛋白在细胞质合成N端含有前导序列的前体蛋白,被线粒体外膜蛋白TOM系统识别并转运,最终转运至线粒体不同区域而发挥作用。重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,rBTI)是一种Potato I型抑制剂,可以特异性靶向线粒体,与线粒体外膜蛋白Tom 20相互作用,引发线粒体功能障碍,进而引起线粒体自噬而发挥抗肿瘤作用。结构分析,rBTI三维结构中含有一个α-螺旋,具备线粒体蛋白前导序列相似性质。rBTI中这一α-螺旋与Tom 20的相互作用与该螺旋的疏水性质是否相关,以及该螺旋的氨基酸疏水性质的改变对rBTI发挥抗肿瘤活性的影响还未知。因此本文将通过探究rBTI靶向线粒体的识别机制,即α螺旋区与Tom20的相互作用,进一步明确该螺旋的氨基酸组成对rBTI的抗肿瘤效应的影响。主要通过以下内容展开:1.采用原核重组方式表达并纯化了Tom20胞内区。Tom20是一种在线粒体蛋白输入的起始受体膜蛋白,它可以识别具有不同氨基酸序列的前导序列。Tom20包含胞...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 线粒体功能
        1.1.1 线粒体功能障碍
        1.1.2 线粒体功能障碍相关疾病
        1.1.3 线粒体靶向分子研究
    1.2 线粒体蛋白转运
        1.2.1 线粒体蛋白转运特点及相关转运因子
        1.2.2 Tom20 的结构与功能
    1.3 研究目的与意义
第二章 Tom20 胞内区的原核表达与纯化
    2.1 引言
    2.2 实验材料、试剂及仪器
        2.2.1 实验材料、试剂
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 rTom20 的构建
        2.3.2 rTom20 的原核表达与纯化
    2.4 实验结果
        2.4.1 rTom20 目的基因成功扩增
        2.4.2 pGEX-4T-1-Tom20 阳性克隆鉴定
        2.4.3 rTom20 的表达与纯化
    2.5 讨论
第三章 rBTI螺旋区多肽与rTom20 的相互作用
    3.1 引言
    3.2 实验材料、试剂及仪器
        3.2.1 实验材料、试剂
        3.2.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 rBTI螺旋区多肽的合成
        3.3.2 多肽与rTom20 相互作用检测——紫外分光光度法
        3.3.3 多肽与rTom20 相互作用检测——等温滴定量热法
    3.4 实验结果
        3.4.1 rBTI螺旋区疏水性质分析
        3.4.2 紫外分光光度计检测多肽与rTom20 相互作用并计算结合常数
        3.4.3 等温滴定量热法检测多肽与rTom20 相互作用并计算结合常数
    3.5 讨论
第四章 rBTI及其突变体对HepG2 细胞增殖的影响
    4.1 引言
    4.2 实验材料、试剂及仪器
        4.2.1 实验材料、试剂
        4.2.2 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 构建rBTI的突变体
        4.3.2 全面表达纯化rBTI及其突变体
        4.3.3 MTT检测多肽、rBTI及其突变体对HepG2 细胞活性的影响
    4.4 实验结果
        4.4.1 成功构建rBTI及其突变体并表达纯化
        4.4.2 MTT检测多肽、rBTI及其突变体蛋白对HepG2 的细胞活性
    4.5 讨论
小结与展望
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介及联系方式



本文编号：3926062