雌二醇及雌激素受体抑制剂对上皮性卵巢癌SKOV3细胞上皮间质转化的影响

发布时间：2017-06-06 21:08

  本文关键词：雌二醇及雌激素受体抑制剂对上皮性卵巢癌SKOV3细胞上皮间质转化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过检测雌激素及其受体抑制剂对体外培养的卵巢癌SKOV3细胞系信号转导通路和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达的影响,探讨雌激素在卵巢癌发生发展机制中的作用。方法:体外培养人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞系,分为正常对照组、E2组、ICI182,780组、E2+ICI182,780组四组。采用MTT比色法检测细胞增殖情况;Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;在培养的不同时点收集细胞并分别以Western-Blot法检测AKT、p-AKT、E-cadherin、Vimentin蛋白表达;RT-PCR检测Snailm RNA、Slug m RNA转录因子表达;免疫荧光检测ER-α、ER-β蛋白表达的经时变化。结果:1.体外培养的SKOV3细胞在雌激素作用24小时后开始出现伪足,细胞由椭圆形变为多边形、纺锤形等间质细胞样形态,随时间推移细胞间质化变化明显,细胞核皱缩。2.E2作用于SKOV3细胞24h、48h后,细胞凋亡率(1.203±0.0764%、1.99±0.1127%)均低于control组(2.857±0.3150%、4.21±0.0173%)(P0.05);ICI182,780作用于SKOV3细胞24h、48h后,细胞凋亡率(5.787±0.8857%、8.44±1.1530%)均高于control组(P0.05);(E2+ICI182,780)组药物作用于SKOV3细胞24h、48h后,细胞凋亡率(4.153±0.1457%、5.98±0.2352%)均高于control组,低于单纯ICI182,780组(P0.05)。3.E2能上调SKOV3细胞p-AKT蛋白表达,并存在时间依赖性,E2+ICI182,780联合应用上调p-AKT蛋白表达的程度低于E2组,ICI182,780能部分抑制E2以上作用(P0.05),三组药物均不改变AKT蛋白表达,差异无统计学意义(P0.05)。4.E2能下调SKOV3细胞E-cadherin蛋白的表达,E2+ICI182,780组联合应用下调E-cadherin蛋白表达程度小于E2组,ICI182,780能部分抑制E2下调E-cadherin蛋白的作用(P0.05);E2能上调SKOV3细胞Vimentin蛋白的表达,E2+ICI182,780组联合应用上调Vimentin蛋白表达程度小于E2组,ICI182,780能部分抑制E2上调Vimentin蛋白的作用(P0.05)。单独应用ICI182,780组药物对E-cadherin、Vimentin两种蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。5.E2作用于SKOV3细胞24小时后,Snail m RNA、Slug m RNA相对表达量升高,E2+ICI182,780组作用于SKOV3细胞24小时后,Snail m RNA、Slug m RNA相对表达量升高,Snail m RNA、Slug m RNA相对表达量升高程度E2组E2+ICI182,780组control组(P0.05)。单独应用ICI182,780组,Snail m RNA、Slug m RNA相对表达量差异无统计学意义(P0.05)。6.SKOV3细胞高表达ERα,E2可使ER-α蛋白表达较control组降低,ICI182,780可使ER-α蛋白表达进一步降低,差异有统计学意义(P0.05)。SKOV3细胞低表达ERβ,各加药组ERβ表达均无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。结论:雌激素E2能够促进SKOV3细胞由上皮形态向间质形态转变,发生EMT的形态学改变;E2促进SKOV3细胞增殖,抑制SKOV3细胞凋亡;E2诱导SKOV3细胞EMT的发生,其可能的机制是E2通过上调p-AKT激活PI3K/AKT信号通路,通过非经典途径上调EMT的上游信号转录因子Snail m RNA、Slug m RNA的表达进而抑制上皮细胞标志物E-cadherin的表达,同时使间质细胞标志物Vimentin增加,诱发SKOV3细胞发生EMT,而雌激素受体抑制剂ICI182,780能部分抑制E2的上述作用。
【关键词】：雌激素E2雌激素受体抑制剂ICI 182 780 SKOV3细胞 上皮-间质转化标志蛋白
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一部分 基础研究12-41
• 前言12-13
• 材料与方法13-20
• 一、材料13-15
• 1.研究对象13
• 2.实验试剂与仪器13-15
• 二 方法15-20
• 1 细胞培养15
• 2 SKOV3 细胞生长曲线测定15
• 3 四甲基偶氮唑兰（MTT）比色法检测药物作用后细胞增殖情况，制成增殖曲线15-16
• 4 流式细胞术测细胞凋亡（Annexin V-FITC）16-17
• 5 蛋白印迹法（Western-Blot）检测 SKOV3 细胞的 E-cadherin、Vimentin、 p-AKT、AKT 蛋白表达17-18
• 6 实时荧光定量 PCR 法（RT-PCR）检测 Snail、Slug 转录因子表达18
• 7 细胞免疫荧光化学检测 ERα、ERβ蛋白表达18-19
• 8 统计学方法19-20
• 结果20-41
• 第二部分 临床病例41-48
• 讨论42-47
• 结论47-48
• 参考文献48-52
• 综述52-70
• 一 雌激素对卵巢癌的多途径影响52-55
• 二 上皮-间质转化介导肿瘤机制55-64
• 参考文献64-70
• 附录1 英文缩写70-71
• 附录2 实验方法71-79
• 致谢79-80

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 韩建秋;吴维光;王勇梅;葛红雨;;抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响(英文)[J];现代肿瘤医学;2011年01期

2 马艳美;陈志华;谢娅;苏sセ

本文编号：427495