香烟烟雾和脂多糖对大鼠肺SP-B蛋白表达的影响

发布时间：2017-07-20 23:23

  本文关键词：香烟烟雾和脂多糖对大鼠肺SP-B蛋白表达的影响

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【摘要】：背景炎症和香烟烟雾是慢性呼吸功能不全的危险因素。在肺组织慢性炎性损伤过程中纤维组织增生、肺泡上皮细胞变性、肺泡活性物质数量和活性下降,是呼吸功能障碍的前提。表面活性物质相关蛋白-B (Surfactantassociated protein B, SP-B)是肺泡表面活性物质中最重要的蛋白成分。革兰氏阴性菌是肺部感染常见的致病菌,脂多糖是革兰氏阴性菌释放的生物活性物质。因此本研究以香烟烟雾暴露大鼠为研究对象,脂多糖大鼠气管内滴注模拟COPD气道炎症环境,观察香烟烟雾和脂多糖对大鼠SP-B表达的影响,并探讨其机制,为慢性呼吸功能障碍的防治提供实验的依据和理论基础。目的通过对正常大鼠、香烟烟雾暴露大鼠、内毒素处理大鼠和香烟烟熏暴露+内毒素处理大鼠的呼吸曲线参数、动脉血氧分压和二氧化碳分压、肺组织SP-B蛋白表达及SP-B mRNA水平的对比,探讨香烟烟雾和内毒素对大鼠肺组织表达SP-B的影响。方法选择SD大鼠40只,数字随机法分为四组,每组Pc0210只。第一组大鼠正常对照组饲养,不做任何处理。第二组大鼠每日烟雾暴露2次,每次30 min,持续暴露28d。第三组大鼠不进行烟雾暴露,第1d、第14d以1 mg.Kg-1的剂量气管内滴注脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)。第四组大鼠每日烟雾暴露2次,每次30 min,持续暴露28d,且在第1d、第14d以1 mg.Kg-1的剂量气管内滴注脂多糖,又称实验组。第29d将四组大鼠4%水合氯醛(10ml.kg-1)腹腔注射麻醉,颈总动脉插管术和颈外静脉插管术,暴露膈肌、两个针式电极将膈肌与BL-420生物信号采集处理系统相连。四组大鼠均保留呼吸曲线,取动脉血和肺组织标本,完成①各组大鼠呼吸曲线参数、动脉血氧分压、动脉血二氧化碳分压的测算。②酶联免疫吸附试验检测各组大鼠肺组织匀浆中SP-B的含量。③免疫组化SP法观察各组大鼠肺组织细胞SP-B表达、HE染色光镜下观察各组家大鼠肺组织形态。④逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测肺组织中SP-B蛋白mRNA水平。对上述结果进行统计学对比分析。结果①吸气持续时间及呼吸幅度,实验组大鼠低于第二组和第三组,第二组和第三组低于第一组,第二组和第三组呼吸幅度相比无差异,但第二组吸气持续时间低于第三组；呼气持续时间及呼吸频率,实验组大鼠高于第二组和第三组、第二组和第三组高于第一组,第二组和第三组相比无差异。②血气指标比较：Pa02,实验组大鼠低于第二组和第三组,第二组和第三组低于第一组,第二组和第三组相比无差异。PaCO2,实验组大鼠高于第二组,第二组高于第三组,第三组高于第一组。③ELISA法检测肺组织匀浆中SP-B含量,实验组大鼠肺组织匀浆中SP-B蛋白含量低于第二组、第二组低于第三组,第三组低于第一组。④HE染色光镜下肺组织结构对比：实验组大鼠呈现呈现间质增生、肺泡结构破坏的病理表现,第二组大鼠也存在间质增生、肺泡结构受损的表现,但程度较实验组轻,第三组大鼠呈现炎症损伤表现,第一组大鼠正常肺组织结构。免疫组化：实验组SP-B蛋白表达低于第二组,第二组低于第三组,第三组低于第一组。⑤实验组SP-B蛋白mRNA水平与第二组相比下调、第二组较第三组下调,第三组又低于第一组。上述结果具有统计学意义。结论香烟烟雾/LPS作为单独的危险因素可使SP-B的表达下调,香烟烟雾和LPS共同作用使SP-B的表达下调更明显。SP-B的下调可使肺顺应性进一步下降,肺换气减少和肺通气量减少。
【关键词】：香烟烟雾 脂多糖 表面活性物质相关蛋白-B 呼吸功能 大鼠
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R56
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-19
• 结果19-25
• 讨论25-29
• 小结29-30
• 参考文献30-37
• 综述：呼吸功能障碍机制的研究进展37-54
• 参考文献45-54
• 附录54-56
• 攻读学位期间发表文章情况56-57
• 致谢57-58
• 个人简历58

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