自噬在晚期糖化终产物诱导MG63细胞分泌炎症因子IL-6中的作用

发布时间：2017-08-01 18:35

  本文关键词：自噬在晚期糖化终产物诱导MG63细胞分泌炎症因子IL-6中的作用

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【摘要】：目的:晚期糖化终产物(AGEs)与糖尿病骨质疏松症相关。本课题组前期研究发现,AGEs通过内质网应激(ERS)途径,促进人成骨肉瘤MG63细胞分泌炎症因子白介素-6(IL-6),并与氧化应激相关。本课题研究AGEs对MG63自噬水平的影响并探讨自噬在AGEs诱导MG63细胞分泌IL-6中的作用,为糖尿病骨质疏松症的研究提供新的思路。方法:1,常规方法制备AGEs。200μg/ml AGEs/BSA,作用MG63细胞0、1、1.5、3、6、12、24、48h,Western-blot检测自噬相关蛋白即微管相关的轻链蛋白3(LC3-II)表达;再以不同浓度(0、50、100、200μg/ml)AGEs/BSA作用MG63细胞24h,Western-blot检测LC3-II表达。2,200μg/ml AGEs作用MG63细胞0、1、3、6h及0、50、100、200μg/ml AGEs/BSA作用MG63细胞6h,流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平,同时设立H2O2阳性对照组;Western-blot观察抑制剂牛磺酸熊脱氧胆酸(TUDCA)(0.1m M、2m M)N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)(2m M、10m M)预处理1h再以200μg/ml AGEs刺激24h后LC3-II表达水平的变化情况。3,自噬诱导剂雷帕霉素(RA)(10n M、100n M)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5m M、10m M)预处理1h后再用200μg/ml AGEs刺激24h,同时设立BSA对照组,MTT检测细胞增殖,微量酶标法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,ELISA检测白介素-6(IL-6)表达。结果:1,AGEs、BSA分别作用于MG63细胞,Western blot结果显示与空白对照组相比,50~200μg/ml AGEs作用细胞24h及200μg/ml AGEs作用细胞1、1.5、3、6、12、24、48h均可上调LC3-II表达水平(P0.01)。2.AGEs、BSA分别作用MG63细胞,流式细胞仪结果显示与空白对照组相比,50~200μg/ml AGEs作用细胞6h及200μg/ml AGEs作用细胞1、3、6h可诱导ROS产生(P0.01);Western blot结果显示与AGEs组相比,TUDCA、NAC均能抑制LC3-II表达(P0.01)。3.与200μg/ml AGEs相比,MTT结果显示RA抑制细胞的生长,降低ALP活性,IL-6生成增多(P0.01);3-MA则促进细胞生长,提高ALP活性,IL-6生成减少(P0.01)。结论:1.AGEs可促进MG63细胞自噬。2.AGEs促进MG63细胞ROS的产生;NAC及TUDCA均能降低AGEs诱导的MG63细胞自噬相关蛋白的表达,说明AGEs促进MG63细胞自噬可能与氧化应激-内质网应激相关。3.抑制自噬使AGEs诱导的MG63细胞增殖、增加ALP活性、减少IL-6分泌。
【关键词】：自噬 晚期糖化终产物 MG63细胞 白介素-6
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R580
【目录】：

• 英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-22
• 结果22-29
• 讨论29-34
• 小结34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 综述39-46
• 参考文献44-46
• 致谢46

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本文编号：605655