吉非替尼对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响

发布时间：2017-08-31 10:37

  本文关键词：吉非替尼对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响

  更多相关文章： 博来霉素 吉非替尼 肺损伤 HUVECs 细胞因子

【摘要】：研究背景博来霉素是一种抗癌类抗生素药,属于碱性糖肽类药物,它的主要功能是抑制胸腺嘧啶核苷,防止胸腺嘧啶核苷参入DNA,与DNA结合,从而使DNA分解破坏。在增殖细胞的细胞周期的S期起着很重要的作用。早在1966年已被成功地用于治疗各种肿瘤,包括肺癌、宫颈癌、阴道癌、食道癌、头颈部及皮肤鳞状癌。博来霉素的不良反应主要是引起间质性肺炎,肺纤维化(也称为纤维性肺泡炎),致病可能性高达10%。吉非替尼,是一种常见的选择性的表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂,主要适用于治疗局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC),或那些在此之前接受了化学治疗且并不适合化疗的病人。通常也能接受转化生长因子和表皮生长因子,刺激成纤维细胞增殖,这一过程在肺纤维化的发病机制中起着重要作用。然而,研究表明,表皮生长因子受体抑制剂(EGFR-TKI)可以抑制表皮生长因子增殖,从而可以防止肺纤维化的形成。研究目的1.观察吉非替尼对博来霉素导致的小鼠肺损伤的影响。2.通过研究博来霉素与吉非替尼的联合用药方案,观察联合用药对HUVECs细胞生长的影响。研究方法1.体内实验首先,构建由博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型,用以研究吉非替尼对小鼠肺纤维化的影响。将C57BL/6小鼠分为3组：分别为控制组,博来霉素组,吉非替尼+博来霉素组。控制组给予气管注射生理盐水,博来霉素组和吉非替尼+博来霉素组给予气管注射博来霉素,之后3周,分别用吉非替尼和盐水给吉非替尼+博来霉素组和博来霉素组灌胃(100mg/kg体重)。3周后,处死小鼠,收集小鼠的肺组织,并研究发病机理。在整个研究期间,每天测量小鼠体重并观察小鼠的身体情况。小鼠的肺组织取出来后,一半固定在10%的甲醛中,留做HE染色；另外一半肺组织保存在空管中,用于提取RNA和蛋白质,将RNA反转录为cDNA,并通过PCR和Western blotting的方法发现在炎性蛋白质的差异。通过检测MPO含量,检测是否存在中性粒细胞及其含量,从而检测炎性因子的活性。2.体外实验体外试验包括细胞培养、细胞分组、细胞处理、细胞间培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。分别用博来霉素、吉非替尼、博来霉素+吉非替尼三种方式刺激培养细胞。将培养的细胞分为四组：正常对照组(A)、博来霉素组(B)、吉非替尼组(C)、博来霉素+吉非替尼组(D)。分别用以下检测方法进行检测：(1)MTT细胞增殖实验检测博来霉素和吉非替尼对细胞的影响；(2)细胞染色实验,细胞迁移实验检测吉非替尼和博来霉素对细胞的毒性影响；(3) RT-PCR的实验方法来检测博来霉素和吉非替尼对HUVECs细胞的一些炎性细胞因子的影响；(4) Western blotting的实验方法来检测博来霉素、吉非替尼、博来霉素+吉非替尼对HUVECs的NF-κB和细胞粘附分子(VCAM-1)的二种蛋白水平影响。实验结果1.体内实验结果小鼠经过21天的药物诱导之后处死,解剖获得小鼠的肺组织,小鼠解剖全程留拍照片,观察小鼠肺部炎症图片,从而看出博来霉素组小鼠比吉非替尼+博来霉素组小鼠炎症更明显,博来霉素组小鼠可以通过吉非替尼的治疗减轻或阻止肺部伤害。病理组织学结果表明,由博来霉素成功诱导的肺纤维化的小鼠,可通过吉非替尼抑制成纤维细胞的增殖。吉非替尼+博来霉素组的小鼠存活率远超过博来霉素组小鼠。结果还表明,吉非替尼+博来霉素组小鼠的体重明显高于博来霉素组小鼠。吉非替尼+博来霉素组小鼠的体重增长几乎与控制组小鼠的体重增长相当。RT-PCR结果表明,博来霉素组小鼠炎症标记物TNF-α,IL-1β和IFNγ明显高于吉非替尼+博来霉素组。博来霉素组与控制组相比,TNF-α,IL-1β和IFNγ的mRNA的表达水平更高,而吉非替尼组,这些炎症标记物的表达水平明显减少。Western blotting结果表明,博来霉素组小鼠的NF-κB的蛋白和细胞粘附分子(VCAM-1)表达水平明显高于控制组和吉非替尼组。且对照组小鼠的蛋白表达水平低于吉非替尼组。2.体外实验的结果MTT方法检测吉非替尼、博来霉素对人脐静脉内皮细胞的增殖和毒性作用：(1)细胞增殖作用：博来霉素组值高于正常对照组组(P0.05),博来霉素组OD值显著高于博来霉素+吉非替尼组(P0.05)。 (2)细胞毒性作用,检测结果显示各组差异并不明显。而细胞抑制实验结果显示,博来霉素对HUVECs细胞增殖有显著的抑制作用,而博来霉素+吉非替尼对HUVECs的细胞抑制效果并不明显,其细胞毒性和凋亡方面也没有显著影响(P0.05)。RT-PCR的检测结果：(1)HUVECs细胞炎性因子mRNA水平博来霉素组与正常对照组相比,博来霉素组的细胞炎性因子如白细胞介素-6、CXCL-2、白细胞介素-8、MCP-1.的mRNA水平明显高于正常对照组(P0.05)。(2)博来霉素+吉非替尼组细胞的炎性因子白细胞介素-6、CXCL-2、白细胞介素-8的mRNA水平明显低于博来霉素组(P0.05)。(3)MCP-1的mRNA水平吉非替尼组显著高于正常对照组(P0.05),博来霉素+吉非替尼组显著高于博来霉素组(P0.05)。以上结果表明在博来霉素刺激下,吉非替尼能够有效的抑制人脐静脉内皮细胞炎性细胞因子(MCP-1除外)的分泌。Western blotting方法检测博来霉素和吉非替尼对人脐静脉内皮细胞的蛋白的表达情况结果如下：(1)正常对照组和吉非替尼组相比,人脐静脉内皮细胞的NF-κ B和VCAM-1的蛋白表达量明显增高(P0.05)。(2)博来霉素组和博来霉素+吉非替尼组相比,人脐静脉内皮细胞的NF-κB、VCAM-1表达量也明显上升(P0.05),以上结果表明博来霉素可以使人脐静脉内皮细胞的NF-κB、VCAM-1蛋白的表达出现明显的上调作用,但此作用可以被吉非替尼抑制。结论体内实验结果表明,在小鼠体内,吉非替尼可以减弱博来霉素诱导的肺纤维化,并通过表皮生长因子的受体酪氨酸激酶抑制剂的作用,选择性地抑制信号传导通路而发挥作用,即抑制间质细胞的增殖以防止肺纤维化。因此可以推断,人肺纤维化治疗过程中,抑制靶向酪氨酸激酶受体的作用可能是关键所在。体外实验表明,通过检测博来霉素和吉非替尼对HUVECs细胞的增殖和毒性的影响以及多种细胞因子、细胞通路蛋白(NF-κB)、细胞黏附分子(VCAM-1)等的表达情况,可以确定吉非替尼可以对博来霉素诱导的人脐静脉内皮细胞的细胞增殖和多种细胞因子的分泌都有很强的抑制作用。
【关键词】：博来霉素 吉非替尼 肺损伤 HUVECs 细胞因子
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563
【目录】：

• 摘要5-9
• Abstract9-13
• 前言13-14
• 一 体内实验14-33
• 材料和方法14-24
• 1.仪器和材料14-17
• 2.试验方法17-23
• 3.统计学分析23-24
• 结果24-30
• 实验讨论30-32
• 实验结论32-33
• 二 体外实验33-50
• 1.材料与方法33-36
• 2.方法36-43
• 实验结果43-47
• 实验讨论47-49
• 实验结论49-50
• 参考文献50-55
• 综述55-65
• 参考文献62-65
• 附录65-66
• 攻读学位期间发表文章情况66-67
• 致谢67-68
• 个人简历68

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陆书生;孙德彬;孙蕾;;吉非替尼治疗肺癌16例临床分析[J];临床肺科杂志;2008年01期

2 钟延霞;陈艳雪;王宝君;;反相高效液相色谱法测定吉非替尼的含量[J];河北师范大学学报(自然科学版);2010年04期

3 许坤;;吉非替尼在老年非小细胞肺癌中的疗效观察[J];中华全科医学;2012年12期

4 玄香兰;安昌善;周彩存;;肝细胞生长因子诱导敏感非小细胞肺癌细胞对吉非替尼耐药及机制的研究[J];中国肺癌杂志;2013年01期

5 李小龙;党亚正;陆婉玲;;低分割放疗联合吉非替尼治疗老年非小细胞肺癌疗效观察[J];西部医学;2013年09期

6 王燕;王颖;王彬;王子平;张湘茹;储大同;孙燕;;吉非替尼治疗非小细胞肺癌脑转移的初步结果[J];中国肺癌杂志;2006年05期

7 陈玲;陈强;叶韵斌;;吉非替尼敏感性预测指标的研究现状[J];中国新药与临床杂志;2006年11期

8 David W Sharp;接英;马建华;;由吉非替尼所引发的持续性讨论[J];科学观察;2006年06期

9 徐朝江;王卓;姚远兵;;吉非替尼治疗肺癌的研究进展[J];医药导报;2007年03期

10 王春敏;李炜;仇缀百;;靶向抗肿瘤药物吉非替尼的临床研究进展[J];中国临床药学杂志;2007年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李陶;李玉;;吉非替尼,厄罗替尼,埃克替尼在济南地区2家三甲医院的应用调查[A];中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编[C];2013年

2 徐瑞彤;束永前;;氟维司群逆转耐吉非替尼非小细胞肺癌细胞株耐药性的机制探讨[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

3 张琳琳;吴志浩;尤嘉琮;李洋;刘彬;祖玲玲;李雪冰;常锐;周清华;;上皮间质转化在尼古丁诱导肺癌吉非替尼获得性耐药中的作用及分子机制[A];第13届全国肺癌学术大会论文汇编[C];2013年

4 陈良安;孔进;田庆;范保星;刘又宁;;吉非替尼治疗中晚期非小细胞肺癌30例分析[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年

5 陈雪琴;陈达栋;李鑫;潘月龙;;吉非替尼所致严重肝损害后再使用一例[A];2013年第六届国家级分子靶点药物治疗新进展学习班暨浙江省肿瘤化疗学术年会论文集[C];2013年

6 王芳;付占昭;顾涛;高立明;;吉非替尼耐药的非小细胞肺癌脑转移继续原药治疗有效的4例报道[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育（2014）[C];2014年

7 傅健飞;王蓓;;吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌敏感性预测指标[A];肿瘤化学治疗新进展学习班资料汇编[C];2007年

8 庄洪卿;秦培艳;袁智勇;王平;;吉非替尼不同给药时间放射增敏作用体外研究[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年

9 肖西祥;;以吉非替尼为例浅谈我国药企的专利布局策略[A];发展知识产权服务业，，支撑创新型国家建设-2012年中华全国专利代理人协会年会第三届知识产权论坛论文选编(第一部分)[C];2011年

10 张国毅;;吉非替尼相关皮疹1例[A];华东六省一市第八次皮肤性病学术会议论文汇编[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 ;吉非替尼：对东方人群情有独钟[N];医药经济报;2005年

2 记者 靖九江;我国研究肯定吉非替尼治疗肺癌效果[N];中国医药报;2006年

3 冯友根;靶向治疗肿瘤药吉非替尼[N];中国医药报;2004年

4 凌栋;国际临床肿瘤专家高度评价埃克替尼[N];中国医药报;2011年

5 盛文;吉非替尼增加肿瘤出血发生率[N];中国医药报;2007年

6 ;吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌有成本效益[N];医药经济报;2004年

7 本报特约撰稿人 陆志诚;进入靶向抗癌新时代[N];医药经济报;2004年

8 侯嘉;关于吉非替尼的SIGN研究[N];医药经济报;2005年

9 广东省人民医院副院长 广东省肺癌研究所所长 吴一龙　本报记者 吴刚;别让医学研究远离患者[N];健康报;2011年

10 张旭;阿斯利康肿瘤靶向药物在欧洲获批[N];中国医药报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 董嵩;依维莫司联合吉非替尼抑制非小细胞肺癌细胞系的效果和机制[D];南方医科大学;2010年

2 潘驰;吉非替尼耐药型非小细胞肺癌中顺铂联合吉非替尼的协同作用机制研究[D];浙江大学;2015年

3 平伟;MicroRNA-181a通过靶向GAS7对非小细胞肺癌吉非替尼敏感性的影响及机制研究[D];华中科技大学;2015年

4 寿佳威;环孢素A通过抑制STAT3增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性[D];浙江大学;2015年

5 张晓琛;HMGB1调控的自噬致非小细胞肺癌吉非替尼获得性耐药机制和后续治疗策略研究[D];浙江大学;2016年

6 王平;吉非替尼治疗非小细胞肺癌的临床疗效和预测因素分析及其致肺纤维化作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年

7 陈佳;成纤维细胞对NSCLC细胞HCC827吉非替尼敏感性的影响及相关机制的探讨[D];第二军医大学;2013年

8 王燕;吉非替尼靶向治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效预测和预后因素研究[D];中国协和医科大学;2007年

9 刘雨桃;吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的疗效与生存分析[D];北京协和医学院;2012年

10 杨小兵;扶正抗癌方对吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的增效研究[D];广州中医药大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 郑悦;康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌NCI-H1975细胞株的作用研究[D];河北医科大学;2015年

2 李焕焕;塞来昔布联合吉非替尼在非小细胞肺癌中的实验研究[D];石河子大学;2015年

3 武玲;不同氧浓度下吉非替尼对人肺癌细胞的影晌[D];山西医科大学;2015年

4 郑杰;表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼的合成与优化[D];复旦大学;2014年

5 沈明辉;6-位修饰的吉非替尼衍生物的合成与活性研究[D];黑龙江大学;2015年

6 刘亮;吉非替尼按时辰给药对荷瘤裸鼠的药效学影响及机制研究[D];青岛大学;2015年

7 纪洁;吉非替尼对奥沙利铂体外抗睾丸癌作用的影响及可能机制[D];蚌埠医学院;2015年

8 李建军;抗肿瘤药物吉非替尼的合成[D];河北医科大学;2015年

9 邱华成;伊立替康与吉非替尼联合应用治疗肝癌的药效学及机制研究[D];浙江工业大学;2015年

10 颜伟伟;抗肿瘤药物吉非替尼(GEFITINIB)的合成工艺研究[D];重庆大学;2015年

本文编号：765112