藤三七叶提取物对高果糖诱发的小鼠胰岛素抵抗的影响及机制探讨

发布时间：2017-09-19 18:25

  本文关键词：藤三七叶提取物对高果糖诱发的小鼠胰岛素抵抗的影响及机制探讨

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【摘要】：目的:本研究旨在通过高果糖饲料诱发ICR小鼠胰岛素抵抗,观察藤三七叶类黄酮和皂甙提取物对小鼠胰岛素抵抗的影响,并探讨藤三七叶提取物的降糖机制。方法:72只雄性ICR小鼠购于大连医科大学实验动物中心,随机分为6组,即对照组、模型组,低剂量类黄酮组、高剂量类黄酮组,低剂量皂甙组和高剂量皂甙组,每组12只。对照组小鼠食用正常饲料和饮用水;模型组小鼠食用60%果糖饲料和正常饮用水;低剂量类黄酮组小鼠食用60%果糖饲料和1%藤三七叶类黄酮提取物饮液;高剂量类黄酮组小鼠食用60%果糖饲料和2%藤三七叶类黄酮提取物饮液;低剂量皂甙组小鼠食用60%果糖饲料和1%藤三七叶皂甙提取物饮液;高剂量皂甙组小鼠食用60%果糖饲料和2%藤三七叶皂甙提取物饮液。在第19周时进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),小鼠禁食12小时后,分别在0,30,60,和120min时间点尾部静脉取血,测试血糖浓度。第20周,小鼠称重后,经眼部穿刺取血获取血清,颈椎脱臼法处死后,解剖获得肝组织并称重。通过小鼠体重和肝脏重量,计算小鼠肝脏脏器系数,评价小鼠肝脏的损伤状况;应用自动生化分析仪检测小鼠空腹血清中葡萄糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的浓度;采用Western Blot免疫印记技术,检测各组小鼠肝脏组织PPARγ蛋白的相对表达水平;采用实时荧光相对定量RT-PCR(q RT-PCR)技术,检测各组小鼠肝组织中PPARγ基因的相对表达水平;小鼠肝脏组织经he染色后,在镜下观察各组小鼠肝脏的病理改变。实验结果用spss17.0统计软件进行统计分析。结果:小鼠肝脏脏器系数结果显示,模型组与对照组比较,小鼠肝脏发生了明显的损伤,差异具有统计学意义(p0.05);低剂量类黄酮组、高剂量类黄酮组和模型组比较,小鼠肝脏脏器系数均无显著性差异(p0.05);高剂量皂甙组与模型组比较,小鼠肝脏损伤得到明显改善,差异具有统计学意义(p0.05)。葡萄糖耐量实验结果显示,模型组与对照组比较,小鼠糖耐量明显发生异常,差异具有统计学意义(p0.05);低剂量类黄酮组和高剂量类黄酮组与模型组比较,小鼠糖耐量差异均无统计学意义(p0.05);低剂量皂甙组和高剂量皂甙组与模型组比较,明显改善小鼠糖耐量异常,差异具有统计学意义(p0.05),且呈剂量-效应关系。模型组与对照组比较,小鼠空腹血清中葡萄糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、和低密度脂蛋白胆固醇的浓度明显升高,高密度脂蛋白胆固醇浓度下降,差异具有统计学意义(p0.05);低剂量类黄酮组和高剂量类黄酮组与模型组比较,差异无统计学意义(p0.05);低剂量皂甙组和高剂量皂甙组与模型组比较,差异具有显著性差异(p0.05),且呈剂量-效应关系。qrt-pcr检测结果显示,模型组与对照组比较,小鼠肝脏组织pparγmrna表达显著降低,差异具有统计学意义(p0.05);低剂量类黄酮组和高剂量类黄酮组与模型组比较均无统计学意义(p0.05);低剂量皂甙组和高剂量皂甙组与模型组比较,pparγmrna的表达显著增高,差异具有统计学意义(p0.05),且呈剂量-效应关系。westernblot检测结果显示,模型组与对照组比较,小鼠肝脏组织pparγ蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(p0.05);低剂量类黄酮组和高剂量类黄酮组与模型组比较均无统计学意义(p0.05);低剂量皂甙组和高剂量皂甙组与模型组比较,小鼠pparγ蛋白的表达显著增高,差异具有统计学意义(p0.05),且呈剂量-效应关系。he染色后,镜下观察,对照组小鼠肝细胞状态良好,肝组织结构清晰可见,未见明显病理改变。模型组、低剂量类黄酮组和高剂量类黄酮组明显出现肝细胞脂肪变性、炎症浸润和形成纤维结缔组织等;低剂量皂甙组和高剂量皂甙组与模型组比较,病理状况得到明显改善。结论:藤三七叶皂甙提取物可以促进小鼠体内pparγ的表达,改善机体糖脂代谢,有效抑制胰岛素抵抗的发生发展,并且呈剂量-效应关系。
【关键词】：藤三七叶提取物 胰岛素抵抗 PPARγ
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 材料与方法15-24
• 1.试剂15-16
• 2.仪器16-17
• 3.藤三七叶提取物饮液的配制17
• 4.动物处理17
• 5.口服葡萄糖耐量试验（OGTT）17-18
• 6.血液和组织样本的采集18
• 7.藤三七对肝脏脏器系数的影响18
• 8.生物化学指标检测18-23
• 8.1.小鼠空腹血清生化指标检测18
• 8.2 酶联免疫吸附实验（ELISA）18-19
• 8.3 实时荧光相对定量RT-PCR19-21
• 8.4 蛋白质印迹法（Western Blot）21-23
• 9.组织学检查23-24
• 10.统计分析24
• 结果24-31
• 1.小鼠一般状况24
• 2.藤三七叶提取物对小鼠肝脏脏器系数的影响24-25
• 3.藤三七叶提取物对小鼠糖耐量的影响25
• 4.藤三七叶提取物对小鼠空腹血清葡萄糖（Glucose）的影响25-26
• 5.藤三七叶提取物对小鼠空腹血清胰岛素的影响26-27
• 6.藤三七叶提取物对小鼠血脂的影响27-28
• 7.藤三七叶提取物对小鼠肝脏PPARγ基因表达的影响28-29
• 8.藤三七叶提取物对小鼠肝脏PPARγ蛋白表达的影响29-30
• 9.藤三七叶提取物对小鼠肝脏病理学改变的影响30-31
• 讨论31-34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 综述39-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49

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