PrP基因多态性及PrP多肽对树突状细胞作用的初步研究

发布时间：2017-12-20 02:15

  本文关键词：PrP基因多态性及PrP多肽对树突状细胞作用的初步研究　出处：《中国农业大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： PrP106-126多肽 NF-κB 树突状细胞 PrP基因 多态性

【摘要】：朊病毒病也称作传染性海绵状脑病(TSEs),是一类人和动物致死性的神经退行性疾病,包括羊瘁病(scrapie)、疯牛病(BSE)和人的克雅氏病(CJD)等。朊病毒是正常细胞型的朊蛋白构象改变后形成的,有的动物对TSE易感,有的则存在种间屏障,甚至同品种间个体也有着差异。因此,本论文通过对3种地方品种家畜的朊蛋白基因多态性进行研究,补充、填补了基因多态性方面的数据空白,便于更好地开展品种改良和TSEs的防控。同时本论文也研究了朊病毒替代模型朊蛋白多肽PrP106-126与树突状细胞之间的相互作用,丰富了朊病毒空间构象改变研究和入侵机制研究的数据。采集89峰双峰驼、112只宁夏滩羊和30只西吉驴的静脉血,应用PCR、基因克隆的方法,扩增并克隆了三种家畜的朊蛋白基因的编码区序列,分析了各自朊蛋白基因PRNP的多态性。双峰驼的PRNP基因ORF区770 bp,编码256个氨基酸。推导出的氨基酸有5个8肽(9肽)重复区,两个9肽的中间是3个8肽重复区。与其他反刍动物相比较,多态性出现在16(A→V)、17(M→T)、120(N→S)、176(R→K)、215(I-→V)、234(S→Y、237(Y→S)和239(Q→G)。89峰双峰驼核苷酸只在264位有2个同义突变T碱基和C碱基。89峰双峰驼基因序列高度保守,本实验中只出现了两种多态性序列,已提交genbank.与单峰驼、绵羊和牛的序列显现出高度一致性,百分值分别是(99.2%,99.1%)、(91.9%,91.8%)和(91.8%,91.6%)。滩羊的PRNP基因ORF区全长768 bp,编码256个氨基酸。滩羊间PRNP和氨基酸的同源性很高,突变主要发生在154和171位的氨基酸残基。112只滩羊136、154和171的等位基因主要是ARQ(86.6%)、AHQ(8.9%)和ARH(4.5%),提示宁夏滩羊这个品种对羊痒病易感。首次报道了西吉驴的PRNP基因多态性的资料。ORF区全长768 bp,编码256个氨基酸。30头西吉驴PRNP的一致性高达99.87%。主要的同义多态性位点是153(C→T、 237(T→C)和354(G→C),氨基酸序列一致性为100%。推导出的氨基酸以MVKSH起始,在45～95位氨基酸间有5个8(9)肽重复区。与其他动物比对显示,西吉驴的氨基酸多态性主要如下：S100T、G101S、E171Q、V206I、K223R、Y225S、E226Q、F228Y、 Q229Y和V244I。西吉驴和其他马科动物间只有两个多态性位点,显示马科动物朊蛋白基因在进化过程中高度保守。与人相比较,三种动物朊蛋白106-126间的112位都发生了M→V的置换。人工合成的朊蛋白多肽106-126在作用于树突状细胞肉瘤细胞(DCs)时,100μ组的DCs在12 h出现一定程度的凋亡,各组没有出现明显的细胞坏死。DCs能够通过NF-κB通路释放细胞因子,信号出现时间在本实验条件下约为1 h-2 h；NF-κB的表达与一定浓度范围内的多肽使用量有相关性。RAGE抑制剂奥美沙坦酯能够抑制RAGE介导的NF-κB通路,提示PrP106-126多肽诱导下的NF-κB通路是由RAGE介导的。
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.2

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本文编号：1310368