昆虫杆状病毒经口感染因子间的相互作用及P74与宿主中肠互作蛋白的研究

发布时间：2017-12-25 00:09

  本文关键词：昆虫杆状病毒经口感染因子间的相互作用及P74与宿主中肠互作蛋白的研究　出处：《浙江大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 杆状病毒 经口感染因子 PIF复合物 酵母双杂交 P74相互作用

【摘要】：昆虫杆状病毒在生活周期中会产生两种表型不同但遗传物质相同的病毒,即出芽型病毒(Budded virus,BV)和包涵体衍生型病毒(Occlusion-derived virus,ODV)。ODV包裹在包涵体中,被幼虫食下后通过感染中肠上皮细胞感染宿主幼虫,这个过程称为经口感染。多种ODV囊膜蛋白在经口感染中发挥关键作用,它们被称为经口感染因子(PIFs)。之前研究表明有9种ODV蛋白,包括 7 种 PIFs：P74、PIF1、PIF2、PIF3、PIF4、PIF6、P95(Ac83)和 2 种ODV特异性蛋白,Ac5和Ac108,可能与ODV表面复合物相关,该复合物被称为PIF复合物。本研究以杆状病毒模式种-苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)为研究对象,利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术探究了与PIF复合物相关的9种蛋白之间相互作用的特点。进一步通过截短和敲除分析了 P95和PIF1相互作用的关键结构域。此外,作为最早被鉴定到的经口感染因子,P74被发现与原发感染中ODV结合中肠上皮细胞相关。为了鉴定宿主中肠细胞中与P74互作的蛋白,构建了家蚕中肠酵母文库,并以P74作为诱饵进行酵母双杂交文库筛选。主要结论如下:1.PIF复合物相关的9种蛋白相互作用的特点。利用酵母双杂交系统共鉴定到6个相互作用,分别为PIF1-PIF2、PIF1-PIF3、PIF1-PIF4、PIF1-P95、PIF2-PIF3 和 PIF3-PIF4,其中 PIF1-PIF3、PIF2-PIF3、PIF1-P95为强相互作用,其他的为中等强度相互作用。P74、PIF6、Ac5和Ac108没有鉴定到参与相互作用。和Y2H结果一致,BiFC分析结果表明复合物中相互作用包括PIF1-PIF2、PIF1-PIF3、PIF1-PIF4、PIF1-P95、PIF2-PIF3 和 PIF3-PIF4,而其他组合没有检测到相互作用。根据这些结果推测PIF1是PIF复合物的中心,其他成分都和PIF1存在相互作用。2.P95和PIF1相互作用的深入分析分别对PIF1和P95进行N端和C端分段截短,然后进行Y2H分析。结果显示截掉P95的第200-300个氨基酸(aa)会破坏PIF1和P95之间相互作用,敲除结果证明P95几丁质结合结构域(224-282aa)为PIF1和P95相互作用的关键结构域。用相同方法证明PIF1的100-200aa也是PIF1和P95相互作用的关键序列。3.P74与家蚕中肠互作蛋白的鉴定提取5龄第3天家蚕幼虫中肠RNA,构建了家蚕中肠酵母文库。以P74作为诱饵对文库进行筛选,共筛选到6种候选蛋白,分别为U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein IMP3、60S ribosomal protein L5、JAB-MPN domain protein、Actin,cytoplasmic A3、35kDa proteasecysteine、histidine-rich protein 1-B 和 eukaryotic translation initiation factor 1A,最后鉴定到 3 种可能的互作蛋白,分别为 JAB-MPN domain protein、Actin,cytoplasmic A3、35kDa protease。免疫共沉淀结果进一步表明JAB-MPN domain protein和P74之间存在强烈互作,这个蛋白可能是ODV结合中肠细胞的关键宿主因子。本研究结果阐明了杆状病毒各经口感染因子之间的相互作用,增加了对PIF复合物的认识,并重点分析了 P95和PIF1相互作用的关键结构域,为研究它们的功能提供结构基础。同时鉴定到了 P74与家蚕中肠的互作蛋白,为进一步阐明昆虫杆状病毒经口感染的详细分子机制提供了参考。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S884.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陆承平;注意杆状病毒科分类的变化[J];中国病毒学;2001年04期

2 王晓玲;魏美才;夏春兰;;昆虫杆状病毒的研究与应用[J];河南农业科学;2006年06期

3 郭锡杰,杨明观,张耀洲;杆状病毒的酪氨酸蛋白磷酸酯酶研究[J];蚕业科学;2000年03期

4 郭锡杰,吴友良;昆虫杆状病毒在生物技术研究中的应用[J];常熟高专学报;2001年04期

5 乌慧玲;曾黎平;吴岩;;杆状病毒基因分子进化研究的新方法[J];蚕业科学;2005年04期

6 刘高强;余晓丹;;昆虫杆状病毒分子生物学及其应用研究的新进展[J];安徽农业科学;2006年09期

7 兰丽盼;吴小锋;;昆虫杆状病毒研究和应用新进展[J];农业生物技术学报;2008年06期

8 马景霞;;昆虫杆状病毒作为外源基因表达载体的应用[J];中国家禽;2008年11期

9 单晓红;唐平;张雨;徐攀;;基于全基因组数据的杆状病毒进化研究进展[J];科技创新导报;2009年28期

10 管致和;昆虫病原杆状病毒的研究和应用[J];世界农业;1985年08期

相关会议论文 前10条

1 贾园;沈阳;邱亚峰;史子学;邵东华;赵福广;马志永;;杆状病毒的应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年

2 叶林柏;陈海雷;郜金荣;朱应;梁东瑞;;昆虫杆状病毒与哺乳动物的相互作用[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年

3 庞义;;昆虫杆状病毒基因工程[A];杀虫微生物[C];1992年

4 宋建华;梁昌镛;陈新文;;杆状病毒介导的p35基因抗哺乳动物细胞凋亡的研究[A];2006年度学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年

5 万永继;;杆状病毒在组织细胞内的感染传输机制及垂直传播途径的分析[A];中国蚕学会商品性小蚕饲养规程和蚕病防控学术研讨会论文集[C];2010年

6 赵耘;罗长宝;何召庆;陈博文;刘尚高;王双山;靳玉芬;欧阳素贞;;猪繁殖与呼吸综合征病毒B_(13)株ORF_5基因在杆状病毒系统中的表达[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

7 蔡艳清;许东林;周国辉;李华平;;广东首次发现甘蔗杆状病毒[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年

8 段宇;周红文;李倩;汪承亚;赵红;覃又文;刘超;陈家伟;;利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的研究[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年

9 杜恩岐;闫锋;卢楠;齐义鹏;;杆状病毒新调控基因p13的结构功能及杀虫潜力研究[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年

10 姜静颖;王斌;宋良国;;一种无包涵体杆状病毒粒子的形态结构电镜观察[A];第九次全国电子显微学会议论文摘要集（Ⅰ）[C];1996年

相关博士学位论文 前10条

1 程若琳;褐飞虱体内共生病毒的研究[D];浙江大学;2016年

2 文莉;杆状病毒定点标记及侵染行为动态示踪[D];武汉大学;2015年

3 郑秦;昆虫杆状病毒经口感染因子间的相互作用及P74与宿主中肠互作蛋白的研究[D];浙江大学;2017年

4 郑浩;利用杆状病毒表达感染性猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究[D];中国农业科学院;2009年

5 刘阳坤;优化杆状病毒系统作为动物疫苗载体的研究[D];西北农林科技大学;2015年

6 姚相杰;杆状病毒介导的丙肝病毒可感染体外细胞培养体系的建立[D];中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）;2007年

7 梁昌镛;杆状病毒与哺乳动物细胞相互作用的研究[D];中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）;2005年

8 王鑫;杆状病毒复制和基因表达的表观遗传学调控研究[D];复旦大学;2010年

9 张敏;双启动子杆状病毒介导~(131)I肿瘤靶向治疗及抗肿瘤新生血管调控的实验研究[D];上海交通大学;2013年

10 陈寅;杆状病毒基因组扫描技术筛选病毒因子和顺式元件及其表达系统的应用[D];中国农业科学院;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 欧艳梅;抗宿主细胞凋亡策略以优化杆状病毒表达载体[D];西北农林科技大学;2015年

2 易命;火地塘林区昆虫和杆状病毒多样性调查[D];西北农林科技大学;2015年

3 王建章;杆状病毒介导的钠碘转运体应用于人下咽癌分子成像和核素基因治疗的可行性研究[D];上海交通大学;2014年

4 刘璐璐;杆状病毒蛋白激酶调控多角体组装及病毒感染的研究[D];扬州大学;2015年

5 黎润彩;杆状病毒AcMNPV microRNA MR40 的鉴定及其靶基因初探[D];中山大学;2015年

6 陈小红;2型猪圆环病毒衣壳蛋白的表达生产[D];华东理工大学;2016年

7 孙生仁;甘蔗杆状病毒群体的分子遗传变异及进化机制[D];福建农林大学;2016年

8 李明晶;对东方粘虫V-ATPase具有基因沉默功能的昆虫杆状病毒的构建[D];西北农林科技大学;2016年

9 聂艳如;PPRV H蛋白的单克隆抗体制备与在杆状病毒中的表达[D];华中农业大学;2016年

10 薛亚男;杆状病毒VLF-1蛋白磷酸化位点功能研究[D];扬州大学;2016年

，

本文编号：1330524