牛源大肠杆菌耐药性和耐药基因检测及对喹诺酮类药物防突变浓度的测定

发布时间：2016-11-01 10:29

  本文关键词：内蒙古地区牛源致病链球菌的耐药性、毒力特征分析及其两者的相关性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《东北农业大学》 2015年

牛源大肠杆菌耐药性和耐药基因检测及对喹诺酮类药物防突变浓度的测定

卢婷  

【摘要】：为预防和治疗细菌性疾病,抗菌药物被广泛的应用于生物学领域,在畜禽养殖业中抗菌药物更是作为饲料添加剂被大量使用,导致细菌耐药现象变得严重,给细菌性疾病的防治带来极大挑战。大肠杆菌作为环境和机体共生菌,同时又是病原菌,其在耐药性传播方面的重要作用一直受到了人们的广泛关注。本研究根据大肠杆菌pho A持家基因序列设计引物,建立对牛源大肠杆菌的PCR检测方法,测序结果显示,扩展片段与大肠杆菌pho A持家基因相似性高,达99.7%,根据建立的PCR检测方法对临床分离菌进行检测,鉴定出105株牛源大肠杆菌。大肠杆菌pho A持家基因PCR检测方法,与传统鉴定方法相比具有灵敏度高,特异性强,检测时间短等特点。本研究参照CLSI推荐的Kirby-Baue法对105株分离菌进行药物敏感性试验。实验结果显示:分离菌对22种抗菌药物均产生不同程度的耐药性,对7种抗菌药物的耐药率超过50%,其中RA(84.76%),AMP(73.58%),TC(69.52%),SIZ(59.05%)的耐药情况严重,而对AMK(84.76%),OFL(80.00%),CIP(76.92%)和NOR(76.19%)等药物较敏感,这些敏感药物多为兽医临床较少使用的抗菌药物。多重耐药指数的计算结果显示,不同地区其值存在显著性差异。分离菌呈现多重耐药现象,且不同地区耐药谱系不同,105株分离菌表现出21种耐药谱,其中最少耐1种药物,最多耐21种药物。分离菌对9种抗菌药物的主要耐药表型有15种,其中AMP+S+TC+C+SIZ和AMP+SIZ耐药表型所占比例最大。由此可见,检测地区的牛源大肠杆菌多重耐药现象较严重,耐药谱广,耐药现状复杂。本研究采用PCR方法检测耐药基因,实验结果证明:在被检测的19种耐药基因中,只有bla CMY-2基因没有检测到,其中sul3基因检出率最高(28.57%),qeq A基因检出率最低(4.76%),且不同地区耐药基因的携带率存在差异。通过耐药性和耐药基因一致性分析可知,分离菌株中存在有耐药性但不携带耐药基因的情况;同时也存在携带耐药基因但不表现耐药表型的情况。多重耐药菌株的出现势必对牛大肠杆菌病的防治带来困难,临床用药时应选择敏感药物,防止耐药性的产生。本研究采用微量稀释法和琼脂平板稀释法,分别测定环丙沙星和氧氟沙星对14株临床分离牛源大肠杆菌敏感株的MIC和MPC,计算和SI。结果显示氧氟沙星和环丙沙星的MIC90分别为0.47μg/ml和1.14μg/ml。以不同浓度MIC为基线测定2种药物对大肠杆菌MPC,结果显示氧氟沙星和环丙沙星对牛源大肠杆菌敏感菌株的MPC90范围分别为0.13~4.11μg/ml和0.96~32.22μg/ml,氧氟沙星的SI(2~8)低于环丙沙星的SI(8~32)。由此可见氧氟沙星的抗菌活力优于环丙沙星,且防突变能力也强于环丙沙星。综上所述,本研究检测的黑龙江部分地区的牛源大肠杆菌的耐药情况较为严重,出现多重耐药菌株,且携带多种耐药基因。在防治细菌性疾病时,应在药敏试验的指导下选择抗菌药物,建立以MSW为理论依据的给药策略,以防止耐药突变菌的产生及优势生长。

【关键词】：
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.61
【目录】：

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本文编号：160725