猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株的致弱评价与相关分子机制研究

发布时间：2016-12-12 09:31

  本文关键词：猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株的致弱评价与相关分子机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

《中国农业大学》 2015年

猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株的致弱评价与相关分子机制研究

刘灿  

【摘要】：为了有效防控PRRS以促进生猪养殖行业的健康发展,本研究从弱毒疫苗参考株的科学评价、PRRSV的体外致弱分子机制的探寻以及华北、华中与华南地区流行PRRSV的分子特征与遗传进化规律的调查等三个方向进行了有益探索。 首先,为了科学评价高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV) BJ株与GD株的传代致弱毒株BJ-F80、BJ-F150、GD-F80与GDr180的安全性与免疫保护性,对接种不同毒株的仔猪从临床表现、增重、病毒血症与抗体水平进行了细致观察,在接种28天后使用强毒株进行了攻毒保护试验,在进行临床观察的同时,定期剖杀各组仔猪观察大体病变,采取肺脏组织制备病理切片以观察显微病理损伤,应用免疫组化染色技术与荧光定量PCR技术分别对肺脏与血清中的PRRSV进行半定量与定量检测,应用ELISA方法检测了不同时间段各组动物血清中抗体水平。结果显示BJ-F80、GD-F80与BJ-F150接种仔猪仍存在不同程度的病理损伤,而GDr180接种仔猪与对照组仔猪均无明显病理变化,免疫组化与荧光定量PCR检测结果显示BJ-F80、GD-F80与BJ-F150的体内增殖速度明显快于GDr180,抗体检测结果显示GDr180在接种后28天以及攻毒后均能提供仔猪更高抗体水平且具备良好的保护效果。综上所述,BJ-F80、GD-F80与BJ-F150的致弱效果并不理想,而GDr180的安全性与免疫保护性达到了理想水平。 其次,为了探索PRRSV的体外致弱分子机制,分别比对分析了PRRSV BJ株传代至BJ-F150株的7个中间代次毒株与GD株传代至GDr180株的8个中间代次毒株的全基因序列与各蛋白氨基酸序列,发现BJ株传代过程中共出现了68个核苷酸变异,造成了37个氨基酸变异,GD株传代过程中共出现了50个核苷酸变异,造成了33个氨基酸变异,但两者的不同点在于BJ株的若干位点出现了反复变异的情况,而GD株的变异位点则显得更为稳定,推测基因变异之后的稳定性与弱毒株的毒力返强风险存在较大关联。然后,将BJ/BJ-F150、GD/GDr180与另外四对强毒株／疫苗株(VR-2332/RespPRRS MLV、JA142/Ingelvac ATP、CH-la/CH-lR与JXAl/JXAl-R)的全基因序列与各蛋白氨基酸序列进行了比对分析,总结归纳出强毒株向弱毒株演化的各个蛋白中的共同变异氨基酸位点共74个,推测其与PRRSV的致病性相关。此外,将上述6对强毒株／致弱株与1996-2014年间中国各地流行PRRSV进行遗传进化分析,发现PRRSV的两个主要分支都与弱毒疫苗株的同源性较高,推测PRRSV在中国的广泛流行与高频率演化与弱毒疫苗的不合理使用有关,应在临床应用中引起重视。 最后,从华北、华中与华南地区的临床病料中分离到3株PRRSV,分别为GD-2011株、HEB-2013株与HUN-2014株,这三株PRRSV均属于北美型中的HP-PRRSV,具有NSP2中的1+29个氨基酸缺失这一基因标志,此外,GD-2011株的GP5中存在1个氨基酸插入为首次报道。将这三株新分离PRRSV与其各属地区的历年分离毒株进行全基因序列与氨基酸序列比对分析以及遗传演化分析,结果表明华北与华南地区流行PRRSV的分子多样性更为复杂,仅北美型毒株即可分为至少3-4个亚型,说明PRRSV在这些地区经历着高频率的变异,而对变异位点的分析提示我们其与弱毒疫苗的过度使用可能相关,因此需引起我们对于合理使用疫苗的重视。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.65
【目录】：

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本文编号：210303