Human iPS培养液对延边黄牛体外受精卵发育的影响

发布时间：2017-02-27 15:59

  本文关键词：Human iPS培养液对延边黄牛体外受精卵发育的影响，由笔耕文化传播整理发布。

《延边大学》 2015年

Human iPS培养液对延边黄牛体外受精卵发育的影响

高青山  

【摘要】：为加强延边黄牛品种保存,保持物种的多样性和保护生态平衡,为延边黄牛品种资源开发和永续利用,本研究围绕如何提高延边黄牛体外生产胚胎移植妊娠率的关键点,从体外受精胚胎各阶段的培养方法,操作技术及移植囊胚质量等环节展开了深入研究,结果如下：1.本试验对延边黄牛体外胚胎生产体系中,如何提高妊娠率的同时,降低生产成本、简化操作程序等方面进行探索研究。试验结果表明同培养液条件下廉价的35mm dish组的卵裂率显著高于(P0.05)昂贵的4孔板组,囊胚发育率没有差异；PBS液精子处理组与BO液精子处理组卵裂率与囊胚率均没有差异,但PBS组相比BO组操作简便且成本低廉；受精时间的比较研究中PBS 22h组比PBS 6h组,BO 6h、22h组都有显著性差异(P0.05)。2.提高囊胚质量和增加囊胚细胞数是十分重要的,含有大量细胞数的囊胚有利于单囊胚分析。正常情况下想要进行DNA的分析往往需要若干个囊胚才能做到,如果能增加单个囊胚的细胞数,我们仅需一个囊胚便可进行DNA分析。囊胚移植是目前为止牛胚胎移植技术最常用的方法,高质量形态的囊胚和具有大量细胞数的囊胚移植后可提高妊娠率。胚胎干细胞(ES)是来源于囊胚内细胞团(ICM),目前已建立人和小鼠的胚胎干细胞,但科学家试图从家畜建立ES细胞系都失败了,部分原因是由于没有制定合适的培养条件,因此,制备一种可获得更大内细胞团的新型体外培养体系,来提高ES细胞系建立的成功率迫在眉睫。.本试验通过比较人诱导多功能干细胞(hiPS)培养基与牛体外培养II型(B-IVC-Ⅱ)培养基,探究了两种培养基对牛体外受精早期胚胎的影响。将体外受精后牛囊胚分别在hiPS培养基、B-IVC-Ⅱ培养基中培养2天,测量囊胚直径,结果显示hiPS培养基组显著高于B-IVC-Ⅱ培养基组,直径分别为150.30±29.49μm与195.58±41.59μm(P0.01),并且牛囊胚总细胞数hiPS培养基组显著高于B-IVC-Ⅱ培养基组,相差2倍之多,细胞数分别为172.12±45.08,604.83±242.64(P0.01)。本实验结果表明,hiPS培养基可以显著提高牛囊胚的质量。3.首次获得地方特色品种延边黄牛的体外受精胚胎移植牛。本试验通过以本地饲养量较大的延边黄牛作为受体母牛,通过胚胎移植技术手段改善肉牛繁殖效率,增加母牛产仔率等。同期发情技术、胚胎移植技术等生物技术的研究、改良及推广,能够加速规模化养殖进程,在地方特色品种的保护和扩繁上发挥关键性作用。本实验表明同期发情组1(添加维生素ADE)、同期发情组2和自然发情各组之间无显著差异(P0.05),其中受胎率最高组为同期发情组1,共同期发情43头,胚胎移植27头,妊娠8头,产犊7头,其受胎率和产犊率分别是29.63%和16.28%；受胎率最低组为自然发情组,共胚胎移植19头,妊娠4头,产犊2头(双胎)见图4.1,其受胎率和产犊率分别是21.43%和10.53%；同期发情组2共同期发情49头,胚胎移植38头,妊娠10头,产犊8头,其受胎率和产犊率分别是26.28%和21.05%。

【关键词】：
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S823.81
【目录】：

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