dna插入突变群体侧翼序列的分离分析和osatrz2的克隆与功能鉴定.pdf 全文免
本文关键词:水稻BAHD酰基转移酶的功能鉴定,由笔耕文化传播整理发布。
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水稻t-dna插入突变群体侧翼序列的分离分析和osatrz2的克隆与功能鉴定.pdf
文档介绍:
水稻T-DNA皤入突变群体侧翼序列的分离分析和伪aTRZ2的克隆与功能鉴定目录摘要?????????????????????????????????iAbs订act???.......?.................?...????????????????????????..??.?.fii缩略词表???????????????????????????????vi1前言????????????????????????????????.11.1水稻功能基因组学研究进展????????????????????l1.1.1水稻基因组测序??????????????????????.11.1.2水稻全基因组的表达分析??????????????????.21.1.3利用突变体开展功能基因组学研究??????????????.31.1.3.1%DNA插入突变体库的创建与利用????????????31.1.3.2转座子插入突变体库的构建与利用????????????81.1.3.3反转录转座子插入突变体库的构建与利用?????????91.1.3.4物理和化学诱变突变体库的构建与利用?????????.101.1.3.5其它产生突变体的方法及利用?????????????.111.1.4利用种质资源进行功能基因组学研究?????????????121.2侧翼序列分离方法和数据库介绍?????????????????..13—1.2.1分离侧寞序列的常用方法??????????????????131.2.2主要的水稻侧翼序列数据库介绍???????????????171.3水稻基因组中T-DNA和Tosl7插入位点的分布与序列特征??????181.3.1T-DNA插入位点的分布与序列特征??????????????181.3.2Tosl7插入位点的分布与序列特征??????????????一191.4叶绿体的发育及其分子调控机制?????????????????.19r.4.1叶绿体的结构和发育过程??????????????????191.4.2叶绿体发育的分子基础???????????????????211.4.2.1叶绿体的发育受到细胞核和叶绿体基因组的双重调控???.211.4.2.2叶绿体DNA复制和代谢相关基因????????????221.4.2.3叶绿体转录系统相关基因???????????????.221.4.2.4叶绿体翻译系统相关基因和突变体???????????.231.4.2.5叶绿体蛋白输入相关基因???????????????.24万方数据华中农业大学2014届博士研究生学位(毕业)论文114.2.6核.质信号传导途径相关基因??????????????.251.5tRNaseZ研究进展????????????????????????251.5.1tRNA3’末端加工与tRNaseZ的发现?????????????..251.5.2tRNaseZ的种类和分布???????????????????..261.5.3tRNageZ属于金属一p一内酰***酶(metallo—p—lactamase)超家族???271.5.4tRNaseZ的功能????????.??????????????281.5.5植物中tRNaseZ的研究进展?????????????????291.6研究目的和意义????????????????????????。302材料和方法?????????????????????????????32.1实验材料???????????????????????????.。3l2.1.1植物材料??????????????????????????3l2.1.2载体和菌株????????????????????????3l2.2实验方法???????????????????????????。322.2.1突变体的种植和筛选????????????????????322.2.2水稻DNA的抽提?????????????????????.322.2.2.1小样法快速制备少量水稻总DNA????????????322.2.2.22mL离心管法快速制备水稻高质量总DNA????????.322.2.2.3大样法制备水稻高质量总DNA?????????????332.2.3PCR阳性检测??????????????????????????????332.2.4T-DNA和Tosl7侧翼序列的分离方法?????????????342.2.4.1TAIL.PCR?????????????????????????????..342.2.4.2反向PCR?????????????????????????????.352.2.4.3接头PCR?????????????????????????..362.2.4.4电泳检测和测序???????????????????..372.2.5侧翼序列的分析??????????????????????372.2.6其他研究小组侧翼序列的收集????????????????382.2.7芯片表达谱数据的处理???????????????????382.2.8叶绿素含量测定??????????????????????382.2.9osatrz2叶片和愈伤的超微结构观察和分析???????????392.2.10PCR检测插入突变体后代基因型??????????????一39万方数据水稻T.DNA插入突变群体侧翼序列的分离分析和OsaTRZ2的克隆与功能鉴定2.2.1l遗传转化载体的构建和转化????????????????.402.2.12osatrz2互补植株的分子鉴定????????????????.412.2.13水稻各组织总RNA抽提、检测及浓度测定??????????422.2.14反转录、反转录PCR和实时定量PCR????????????422.2.15小RNA分子的PAGE.northern杂交?????????????442.2.16OsaTRZ2亚细胞定位分析?????????????????..452.2.17OsaTRZ2蛋白的原核表达与纯化??????????????..452.2.18tRNA前体的体外转录???????????????????462.2.19tRNA3’末端体外加工实验?????????????????.463结果与分析?????????????????????????????..483.1水稻T-DNA插入突变体库To代植株阳性检测???????????..483.2T-DNA和Tosl7侧翼序列的分离、命名与验证???????????..483-3T-DNA和Tosl7插入位点的分布与序列特征?????????????493.3.1侧翼序列的分类和插入位点的确定??????????????493.3.2不同遗传背景下T-DNA和Tosl7插入位点的分布特征相似???.
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