饲料中呕吐毒素单抗的研制及icELISA试剂盒和GICA试纸条检测方法的建立

发布时间：2021-03-19 18:18

　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）又称呕吐毒素（vomitoxin）,是一种毒性较高的次级代谢产物,主要是由黄色镰刀菌（Fusarium culmorum）和禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）产生,属于B族单端孢霉烯族化合物。DON主要污染小麦、玉米及其副产物,因此,广泛存在于自然界中的食品及动物饲料中。它易引起动物拒食,而表现出免疫毒性、器官毒性、抑制蛋白质合成,以及致畸性,与免疫抑制、克山病、食管癌等疾病也有密切联系,并且,DON的热稳定性较强,对其进行一般性的加工及烹调,其毒性不能被破坏。因此,DON污染不仅给动物健康带来了巨大威胁,也影响到了人类的身体健康,全球大多数国家强制性规定了DON的限量标准,国际癌症研究机构将DON列为Ⅲ类致癌物。目前,检测食品和饲料中DON污染的理化方法,虽然具有高精度和高灵敏度,但是成本较高,不适合用于DON污染检测的一般饲料行业。而酶联免疫检测（ELISA）作为传统方法,不需要特殊的仪器设备、适合现场并且适用于高通量筛选等特点,被认为是一种合适的检测工具,近年来其开发应用迅速发展。目的:本研究以DON毒素为研究对象,为避免理化检测的... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

种人工抗原的UV扫描谱图

石河子大学博士学位论文饲料中呕吐毒素单抗的研制及icELISA试剂盒和GICA试纸条检测方法的建立302.1.3IR鉴定结果见图1-7。4种方法制备的免疫原DON-BSA（CDI）、DON-BSA（EDC）、DON-BSA（IBCF）、DON-BSA（NHS）与BSA相比较，它们都具有载体蛋白BSA的氨基酸特征峰，它们的IR在2500～3200cm-1和1660～1500cm-1的区域内有相似的吸收，说明人工抗原中有BSA的存在；人工抗原与DON的红外线吸收结果相比较，在1050～1150cm-1的区域内有相似的吸收，这是DON中醇羟基产生的特征峰，而BSA在此处无吸收，说明人工抗原中含有DON。试验结果表明，4种免疫原均合成成功。图1-74种人工抗原的IR扫描谱图Fig.1-7TheIRidentificationoffourartificialantigen2.1.4SDS-PAGE鉴定结果见图1-8。BSA的分子量约为66.4KD，DON的分子量为0.296KD。4种方法制备的免疫原DON-BSA（CDI）、DON-BSA（EDC）、DON-BSA（IBCF）、DON-BSA（NHS）的蛋白条带与BSA条带相比较，它们的位置均较靠上，说明免疫原的泳动较BSA速度慢，也就是人工抗原的分子量高于BSA。由此可以初步证明4种免疫原均合成成功。

石河子大学博士学位论文饲料中呕吐毒素单抗的研制及icELISA试剂盒和GICA试纸条检测方法的建立31注：1Maker.2BSA.3DON-BSA(CDI).4DON-BSA(EDC).5Blank.6DON-BSA(IBCF).7DON-BSA(NHS).图1-84种人工抗原的SDS-PAGE鉴定Fig.1-8TheSDS-PAGEcharacteristicoffourartificialantigen2.2人工抗原的免疫学特性试验结果2.2.1效价测定结果见表1-1及图1-9。对雌性Balb/C小鼠免疫，大小为6周龄，采用4种方法合成的免疫原免疫，每种免疫原免疫1组共4组。经5次免疫后，用间接ELISA测定效价并进行比较，共挑选出4只小鼠，从每组挑选小鼠1只最高效价的，多抗血清效价都达到了1∶（1.6×103）。试验结果表明，4种免疫原的效价都符合要求，但按评价的免疫效果，由高到低依次为DON-BSA（CDI）、DON-BSA（EDC）、DON-BSA（IBCF）、DON-BSA（NHS）。表1-14只小鼠多抗的效价测定Table1-1ThetitersdeterminationofDONpAboffourmice序号抗血清稀释倍数dilutedmultipleofantiserum阴性空白Number2004008001600320064001280025600NegativeBlankEDC1.4730.8170.4270.2380.1470.1020.0920.0790.0640.055NHS1.2850.6780.2690.1320.0850.0790.0750.0680.0620.060CDI2.1821.7241.2790.8090.4460.2560.1640.1350.0890.075IBCF1.9821.5321.0310.6180.3240.1710.1380.1160.0850.072

【参考文献】：
期刊论文
[1]脱氧雪腐镰刀菌烯醇间接竞争酶联免疫吸附测定试剂盒的研制及初步应用[J]. 韩丽,张文举,王自良,李月涛,姜金庆,李任峰,范国英,张海棠,牛琳琳,吕俊美,周叶.  动物营养学报. 2019(11)
[2]T-2毒素快速定量检测试纸条的研究[J]. 许会静,李玉杰,张馨月,王弘瑞,苗茁,柳玉,李艳,王会岩,董媛.  食品研究与开发. 2019(19)
[3]2018年19省市饲料及饲料原料霉菌毒素污染状况分析[J]. 黄俊恒,黄广明.  养猪. 2019(03)
[4]2018年我国部分地区饲料及饲用原料霉菌毒素污染调查报告[J]. 杜妮.  猪业科学. 2019(02)
[5]2017年我国部分地区饲料及饲用原料霉菌毒素污染调查报告[J]. 杜妮.  猪业科学. 2018(02)
[6]黄曲霉毒素B1半抗原分子设计与抗原合成及抗体特性研究进展[J]. 王亚楠,王晓斐,牛琳琳,雷壮,张海棠,王自良.  食品工业科技. 2016(23)
[7]蜂毒的主要成分及药理作用的研究进展[J]. 张冰清,刘晓波.  药学研究. 2016(03)
[8]我国西南地区肉禽配合饲料中霉菌毒素的污染分布规律[J]. 李雅伶,王建萍,李云,丁雪梅,白世平,曾秋凤,程传民,高庆军,柏凡,张克英.  动物营养学报. 2016(02)
[9]液相色谱-串联质谱测定小麦粉中11种真菌毒素[J]. 李磊,李海畅,周贻兵,林野.  食品研究与开发. 2016(03)
[10]ELISA检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的优化[J]. 侯霄煜.  现代预防医学. 2015(03)

博士论文
[1]脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）的多代毒性及其联合毒性研究[D]. 周鸿媛.江南大学 2018
[2]食品中真菌毒素抗体制备及其快速检测方法研究[D]. 孔德昭.江南大学 2017
[3]真菌毒素类高灵敏高通量快速检测方法研究[D]. 张勋.江南大学 2014
[4]B型单端孢霉烯族毒素诱导拒食和呕吐的机理研究[D]. 吴文达.南京农业大学 2012
[5]DON诱导的小麦TaPDR1基因的克隆和特征分析以及二穗短柄草多倍体中PDR1基因的系统进化[D]. 尚毅.南京农业大学 2009

硕士论文
[1]同时检测谷物及中药材中伏马毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫层析方法的研究[D]. 黄馨雨.南昌大学 2019
[2]黄曲霉毒素广谱特异性抗体的制备及总量检测免疫试纸方法的建立[D]. 王亚楠.河南科技学院 2017
[3]脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金检测试纸条的研制[D]. 李奕亭.集美大学 2016
[4]同时检测多种真菌毒素的生物芯片技术研究[D]. 王莹.华中农业大学 2012
[5]莱克多巴胺胶体金试纸条生产工艺研究[D]. 黄晓明.暨南大学 2011
[6]农产品中呕吐毒素的酶联免疫检测方法的研究[D]. 马冬月.天津科技大学 2010
[7]脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）人工抗原的合成及其酶联免疫检测方法的建立[D]. 李华.南京农业大学 2003



本文编号：3090006