赖氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b通过调节核内β-Catenin的稳定性调控非洲爪蛙胚胎体轴的形成
发布时间：2021-04-02 02:28
在脊椎动物早期胚胎发育的过程中,其背腹体轴、前后体轴、左右体轴的建立是整个生物个体发育进程中的重大事件,涉及到很多信号转导通路和相应的信号转导因子的精密调控,例如Wnt信号通路、BMP信号通路、Nodal信号通路、FGF信号通路等等。其中,Wnt信号的活性在胚胎生成过程中所形成的活性梯度对于整个机体体轴的建立起到了至关重要的作用：母源的Wnt信号会特化胚胎背前部的形成；合子的Wnt信号主要负责胚胎后部腹部化的形成。Wnt/β-Catenin信号通路在调节胚胎的形成,肿瘤形成,机体内环境的稳态,机体再生以及胚胎干细胞的多能性等方面发挥了重要的作用。许多类型的癌症和Wnt/β-Catenin信号活性的错误调控都是相互关联的,同样在在非洲爪蛙胚胎中母源的P-Catenin的缺失会使organizer和背部体轴都不能形成。β-Catenin稳定性的调节是调控Wnt/β-Catenin信号活性的一种主要机制,同时核内高水平的β-Catenin也作为一些肿瘤的不良病状预断。在没有Wnt蛋白激活的情况下,胞质内会形成由APC,GSK3,CK1和β-TrCP形成的降解复合体,其中CK1和GSK3会使β...
【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文名词对照表
第一章 文章综述
1.1 前言
1.2 非洲爪蛙早期胚胎的形成
1.2.1 非洲爪蛙——一种经典的动物模型
1.2.2 非洲爪蛙胚胎的皮质旋转和母源的Wnt/β-Catenin信号
1.2.3 中囊胚转换
1.2.4 组织者区和胚胎体轴的形成
1.2.5 母源和合子Wnt/β-Catenin信号参与胚胎体轴形成
1.3 Wnt/β-Catenin信号通路
1.3.1 经典的Wnt/β-Catenin信号转导机制概述
1.3.1.1 细胞膜上的Wnt/β-Catenin信号——受体复合体
1.3.1.2 细胞质中的β-Catenin降解复合体
1.3.1.3 细胞核中的转录复合体
1.3.2 β-Catenin的核质转运
1.3.3 β-Catenin参与细胞之间的粘连
1.4 赖氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b
1.4.1 组蛋白赖氨酸甲基化和去甲基化修饰
1.4.2 Kdm2a/Kdm2b的结构和功能
1.4.3 Kdm2a/Kdm2b相关的研究进展
1.5 结语
1.6 参考文献
第二章 赖氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b调节早期胚胎体轴的形成
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 质粒的构建
2.2.2 体外转录反义RNA探针及设计反义吗啡啉
2.2.3 非洲爪蛙胚胎的收集、培养以及显微注射
2.2.4 整体原位杂交
2.2.5 非洲爪蛙胚胎的全胚胎蛋白的提取
2.2.6 试剂配方
2.2.7 数据分析
2.3 结果
2.3.1 赖氨酸去甲基化酶Kdm2a和Kdm2b是进化上保守的蛋白
2.3.2 Kdm2a和Kdm2b具有相似的表达谱
2.3.3 Kdm2a/Kdm2b参与非洲爪蛙胚胎前后体轴的形成
2.3.4 敲降Kdm2a/Kdm2b会上调非洲爪蛙胚胎前部组织的标志基因
2.3.5 敲降Kdm2a/Kdm2b会下调非洲爪蛙胚胎后部组织的标志基因
2.3.6 Kdm2a和Kdm2b存在功能冗余和互补的作用
2.3.7 Kdm2a和Kdm2b很有可能对胚胎的神经发育过程也起到调节作用
2.4 讨论
2.5 参考文献
第三章 Kdm2a/Kdm2b调节细胞核内β-Catenin的稳定性
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 质粒的构建
3.2.2 非洲爪蛙胚胎的收集、培养以及显微注射
3.2.3 整体原位杂交
3.2.4 总RNA的提取
3.2.5 cDNA的制备
3.2.6 反转录聚合酶链式反应
3.2.7 实时定量反转录聚合酶链式反应
3.2.8 紫外线照射胚胎
3.2.9 动物帽解聚/重聚实验
3.2.10 细胞转染
3.2.11 细胞裂解液的提取
3.2.12 荧光素酶分析
3.2.13 免疫印迹
3.2.14 免疫共沉淀
3.2.15 抗体
3.2.16 试剂配方
3.2.17 数据分析
3.3 结果
3.3.1 在非洲爪蛙胚胎内敲降Kdm2a/Kdm2b之后会激活母源和合子的Wnt/β-Catenin信号通路的靶基因
3.3.2 Kdm2a/Kdm2b调控Wnt/β-Catenin信号的活性
3.3.3 Kdm2a在翻译水平上影响了β-Catenin的稳定性
3.3.4 Kdm2a/Kdm2b抑制由于过表达β-Catenin和ΔNβ-Cat所诱导的胚胎第二体轴的形成
3.3.5 Kdm2a/Kdm2b作用于Tcf711的上游
3.3.6 敲降Kdm2a/Kdm2b不能拯救由紫外线照射引起的胚胎腹部化表型
3.3.7 Kdm2a/Kdm2b在细胞核内抑制活化的β-Catenin活性且敲降Kdm2a/Kdm2b会增加原肠胚期β-Catenin的甲基化水平
3.3.8 Kdm2a/Kdm2b调控β-Catenin活性并参与调节和前后体轴形成相关的基因表达
3.3.9 Kdm2a/Kdm2b不直接参与调节细胞之间的粘连
3.4 讨论
3.5 参考文献
附录1 相关试剂配制方法
附录2 攻读博士学位期间参与的工作及取得成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Wnt signaling in disease and in development[J]. Roel NUSSE. Cell Research. 2005(01)
本文编号：3114418
【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文名词对照表
第一章 文章综述
1.1 前言
1.2 非洲爪蛙早期胚胎的形成
1.2.1 非洲爪蛙——一种经典的动物模型
1.2.2 非洲爪蛙胚胎的皮质旋转和母源的Wnt/β-Catenin信号
1.2.3 中囊胚转换
1.2.4 组织者区和胚胎体轴的形成
1.2.5 母源和合子Wnt/β-Catenin信号参与胚胎体轴形成
1.3 Wnt/β-Catenin信号通路
1.3.1 经典的Wnt/β-Catenin信号转导机制概述
1.3.1.1 细胞膜上的Wnt/β-Catenin信号——受体复合体
1.3.1.2 细胞质中的β-Catenin降解复合体
1.3.1.3 细胞核中的转录复合体
1.3.2 β-Catenin的核质转运
1.3.3 β-Catenin参与细胞之间的粘连
1.4 赖氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b
1.4.1 组蛋白赖氨酸甲基化和去甲基化修饰
1.4.2 Kdm2a/Kdm2b的结构和功能
1.4.3 Kdm2a/Kdm2b相关的研究进展
1.5 结语
1.6 参考文献
第二章 赖氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b调节早期胚胎体轴的形成
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 质粒的构建
2.2.2 体外转录反义RNA探针及设计反义吗啡啉
2.2.3 非洲爪蛙胚胎的收集、培养以及显微注射
2.2.4 整体原位杂交
2.2.5 非洲爪蛙胚胎的全胚胎蛋白的提取
2.2.6 试剂配方
2.2.7 数据分析
2.3 结果
2.3.1 赖氨酸去甲基化酶Kdm2a和Kdm2b是进化上保守的蛋白
2.3.2 Kdm2a和Kdm2b具有相似的表达谱
2.3.3 Kdm2a/Kdm2b参与非洲爪蛙胚胎前后体轴的形成
2.3.4 敲降Kdm2a/Kdm2b会上调非洲爪蛙胚胎前部组织的标志基因
2.3.5 敲降Kdm2a/Kdm2b会下调非洲爪蛙胚胎后部组织的标志基因
2.3.6 Kdm2a和Kdm2b存在功能冗余和互补的作用
2.3.7 Kdm2a和Kdm2b很有可能对胚胎的神经发育过程也起到调节作用
2.4 讨论
2.5 参考文献
第三章 Kdm2a/Kdm2b调节细胞核内β-Catenin的稳定性
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 质粒的构建
3.2.2 非洲爪蛙胚胎的收集、培养以及显微注射
3.2.3 整体原位杂交
3.2.4 总RNA的提取
3.2.5 cDNA的制备
3.2.6 反转录聚合酶链式反应
3.2.7 实时定量反转录聚合酶链式反应
3.2.8 紫外线照射胚胎
3.2.9 动物帽解聚/重聚实验
3.2.10 细胞转染
3.2.11 细胞裂解液的提取
3.2.12 荧光素酶分析
3.2.13 免疫印迹
3.2.14 免疫共沉淀
3.2.15 抗体
3.2.16 试剂配方
3.2.17 数据分析
3.3 结果
3.3.1 在非洲爪蛙胚胎内敲降Kdm2a/Kdm2b之后会激活母源和合子的Wnt/β-Catenin信号通路的靶基因
3.3.2 Kdm2a/Kdm2b调控Wnt/β-Catenin信号的活性
3.3.3 Kdm2a在翻译水平上影响了β-Catenin的稳定性
3.3.4 Kdm2a/Kdm2b抑制由于过表达β-Catenin和ΔNβ-Cat所诱导的胚胎第二体轴的形成
3.3.5 Kdm2a/Kdm2b作用于Tcf711的上游
3.3.6 敲降Kdm2a/Kdm2b不能拯救由紫外线照射引起的胚胎腹部化表型
3.3.7 Kdm2a/Kdm2b在细胞核内抑制活化的β-Catenin活性且敲降Kdm2a/Kdm2b会增加原肠胚期β-Catenin的甲基化水平
3.3.8 Kdm2a/Kdm2b调控β-Catenin活性并参与调节和前后体轴形成相关的基因表达
3.3.9 Kdm2a/Kdm2b不直接参与调节细胞之间的粘连
3.4 讨论
3.5 参考文献
附录1 相关试剂配制方法
附录2 攻读博士学位期间参与的工作及取得成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Wnt signaling in disease and in development[J]. Roel NUSSE. Cell Research. 2005(01)
本文编号：3114418
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/nykjbs/3114418.html
