哺乳动物卵母细胞染色质构型分类与发育能力的关系研究

发布时间：2021-04-20 11:15

　　哺乳动物卵母细胞的生发泡（germinal vesicle,GV）染色质最初是不凝集的,随着卵母细胞生长,染色质会凝集成不同的构型。生发泡染色质构型与卵母细胞发育能力相关。然而,过去报导的卵母细胞生发泡染色质构型分类标准不统一,并且不能很好地与卵母细胞发育能力联系起来。因此,亟需建立卵母细胞染色质构型分类标准,进而明确其与发育能力的关系。此外,玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）可进入食物链引起健康问题,因此研究其对卵母细胞的毒性作用对人类和动物的健康生殖都具有重要意义。体内和体外ZEN暴露都损伤卵母细胞的发育能力,但其作用机理并不清楚。本研究目的是对卵母细胞染色质构型进行分类,探究ZEN对染色质构型的影响。从GV期染色质构型角度探索其影响卵母细胞质量的潜在机制,深入研究卵母细胞染色质构型与发育能力的关系。首先,本研究利用改进的能够清楚地观察到卵母细胞核仁和染色质的Hoechst33342染色方法,将猪和小鼠GV期卵母细胞按照染色质围绕核仁凝集程度和在核质中的分布情况分为8种构型。然后比较大小卵泡、健康与闭锁、卵巢运输与保存和不同培养基的染色质构型分布确定各构型的发育能力。最... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

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符号说明
中文摘要
Abstract
1.前言
    1.1 卵母细胞的成熟
        1.1.1 核成熟与胞质成熟
        1.1.2 卵母细胞的体外成熟
        1.1.3 卵母细胞胞质成熟的标志
        1.1.4 影响卵母细胞成熟和发育的因素
    1.2 卵母细胞生发泡染色质构型
        1.2.1 卵母细胞生发泡
        1.2.2 卵母细胞染色质构型的概念
        1.2.3 卵母细胞染色质构型的分类
        1.2.4 卵母细胞生长和成熟期间GV染色质构型变化
        1.2.5 卵母细胞染色质构型与转录活性的关系
        1.2.6 卵母细胞染色质构型与发育能力的关系
        1.2.7 卵母细胞染色质构型与卵泡闭锁的关系
        1.2.8 其他影响卵母细胞染色质构型的因素
    1.3 玉米赤霉烯酮对卵母细胞发育能力的影响
        1.3.1 玉米赤霉烯酮对雌性动物生殖的影响
        1.3.2 玉米赤霉烯酮对卵母细胞纺锤体组装与染色体整倍性的影响
        1.3.3 玉米赤霉烯酮与氧化应激
        1.3.4 玉米赤霉烯酮与染色体畸变
        1.3.5 玉米赤霉烯酮与基因转录
    1.4 本研究的主要内容和目的意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要试剂及配制
        2.1.2 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验动物饲养及小鼠超排处理
        2.2.2 小鼠玉米赤霉烯酮注射方案
        2.2.3 猪卵巢的收集与处理
        2.2.4 猪健康卵泡与闭锁卵泡的判定
        2.2.5 卵母细胞的收集
        2.2.6 卵母细胞生发泡染色质构型的观察
        2.2.7 猪卵丘细胞凋亡检测
        2.2.8 卵母细胞体外培养
        2.2.9 卵母细胞的孤雌激活和胚胎培养
        2.2.10 小鼠卵母细胞ROS水平检测
        2.2.11 小鼠卵母细胞MI期纺锤体染色
        2.2.12 小鼠MII期卵母细胞染色体延展
        2.2.13 小鼠卵母细胞JC-1染色
        2.2.14 小鼠卵母细胞谷胱甘肽水平检测
        2.2.15 总体转录活性的检测
        2.2.16 荧光定量PCR
        2.2.17 数据分析
3 结果与分析
    3.1 猪和小鼠卵母细胞GV染色质构型分类
        3.1.1 猪卵母细胞GV染色质构型分类
        3.1.2 小鼠卵母细胞GV染色质构型分类
    3.2 猪不同大小卵泡卵母细胞GV染色质构型和体外成熟率
        3.2.1 猪1-2mm和3-6mm卵泡的卵母细胞GV染色质构型
        3.2.2 猪1-2mm和3-6mm卵泡的卵母细胞体外成熟率
    3.3 猪健康和闭锁卵泡卵母细胞GV染色质构型和体外成熟率
        3.3.1 猪健康和闭锁卵泡的卵母细胞的形态学判定
        3.3.2 猪健康和闭锁卵泡的卵丘细胞凋亡情况
        3.3.3 猪卵巢直径1-2mm健康和闭锁卵泡卵母细胞GV染色质构型比例
        3.3.4 猪1-2mm健康和闭锁卵泡卵母细胞体外成熟率
        3.3.5 猪卵巢3-6mm健康和闭锁卵泡卵母细胞GV染色质构型比例
        3.3.6 猪3-6mm健康和闭锁卵泡卵母细胞体外成熟率
    3.4 卵巢处理对猪卵母细胞GV染色质构型和体外成熟的影响
        3.4.1 卵巢处理对猪卵母细胞GV染色质构型的影响
        3.4.2 卵巢处理对猪卵母细胞体外成熟的影响
    3.5 猪卵母细胞体外培养过程中染色质构型的动态改变
        3.5.1 猪1-2mm健康卵泡卵母细胞体外培养过程中的染色质构型转变
        3.5.2 猪3-6mm健康卵泡卵母细胞体外培养过程中的染色质构型变化
        3.5.3 猪1-2mm闭锁卵泡卵母细胞体外培养过程中的染色质构型变化
    3.6 培养基对猪卵母细胞GV染色质构型和体外成熟的影响
        3.6.1 培养基对猪1-2mm健康卵泡卵母细胞染色质构型的影响
        3.6.2 培养基对猪1-2mm健康卵泡卵母细胞成熟率的影响
        3.6.3 培养基对猪3-6mm健康卵泡卵母细胞染色质构型的影响
        3.6.4 培养基对猪3-6mm健康卵泡卵母细胞成熟率的影响
    3.7 猪卵母细胞不同染色质构型的整体转录活性
        3.7.1 猪卵母细胞染色质构型与转录活性的关系
        3.7.2 猪卵母细胞各染色质构型发生转录活动的比例
    3.8 Roscovitine抑制GVBD后的猪卵母细胞染色质构型和发育能力
        3.8.1 Roscovitine抑制GVBD后的猪卵母细胞染色质构型
        3.8.2 Roscovitine抑制GVBD后的猪卵母细胞体外发育能力
    3.9 猪卵母细胞GV染色质构型的转变通路
    3.10 ZEN对猪卵母细胞体外成熟和染色质构型的影响
        3.10.1 ZEN对猪卵母细胞体外成熟的影响
        3.10.2 ZEN对猪卵母细胞染色质构型的影响
    3.11 ZEN对小鼠卵母细胞体外成熟胚胎发育能力的影响
    3.12 ZEN暴露对小鼠卵母细胞纺锤体形态的影响
        3.12.1 ZEN暴露对小鼠卵母细胞MI期纺锤体形态的影响
        3.12.2 ZEN暴露对小鼠卵母细胞染色体整倍性的影响
    3.13 ZEN暴露对小鼠卵母细胞内氧化还原水平的影响
        3.13.1 ZEN暴露对小鼠卵母细胞内谷胱甘肽水平的影响
        3.13.2 ZEN暴露对小鼠卵母细胞内谷胱甘肽水平的影响
        3.13.3 ZEN暴露对小鼠卵母细胞内线粒体膜电位的影响
    3.14 ZEN暴露对小鼠卵母细胞GV染色质构型的影响
    3.15 ZEN暴露对小鼠卵母细胞GV期基因转录水平的影响
        3.15.1 ZEN暴露后小鼠卵母细胞各染色质构型与转录活动
        3.15.2 ZEN暴露对小鼠不同构型卵母细胞发生转录比例的影响
        3.15.3 ZEN暴露对不同构型卵母细胞的转录强度的影响
        3.15.4 ZEN对小鼠卵母细胞发育能力、纺锤体组装、氧化还原能力和凋亡相关基因表达的影响
4 讨论
    4.1 卵母细胞染色质构型的新分类
        4.1.1 猪卵母细胞染色质构型的新分类
        4.1.2 小鼠卵母细胞染色质构型的新分类
    4.2 卵母细胞染色质构型转变与发育能力的关系
        4.2.1 生长过程中的卵母细胞染色质构型转变与发育能力的关系
        4.2.2 卵巢处理后的卵母细胞染色质构型转变与发育能力的关系
        4.2.3 闭锁卵泡中的卵母细胞染色质构型转变与发育能力的关系
        4.2.4 体外培养过程中的卵母细胞染色质构型转变与发育能力的关系
        4.2.5 不同培养基中卵母细胞染色质构型转变与发育能力的关系
    4.3 各染色质构型的整体转录水平转录与发育能力
    4.4 ZEN体内暴露模型的有效性
    4.5 ZEN暴露损害卵母细胞的发育能力
    4.6 ZEN破坏卵母细胞纺锤体组装和染色体分离
    4.7 ZEN引起卵母细胞氧化应激
    4.8 ZEN引起卵母细胞染色质构型提前凝集
    4.9 ZEN引起卵母细胞基因转录水平下降
5 结论
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表论文情况



本文编号：3149573