日粮精料水平对瘤胃上皮生长的影响及调节作用研究

发布时间：2021-04-20 19:06

　　反刍动物瘤胃微生物发酵产生的短链脂肪酸（SCFA）是反刍动物主要的能量来源,可提供机体所需能量的60-80%;SCFA更是调节生命活动的信号因子。研究表明日粮精料水平影响瘤胃上皮的生长,但其中的机理不完全清楚。本论文旨在研究日粮精料水平对瘤胃上皮细胞增殖和细胞凋亡的影响及其机制。第一章日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞生长的影响及SCFA和pH的作用12只山羊随机分成低精料组（LC,n=6）和中等精料组（MC,n=6）,饲喂粗料分别添加10%与35%精料的两种日粮。实验期间,山羊于每日的8:00与18:00饲喂,且自由饮水。实验进行21天后,山羊在晨饲后6小时屠宰,采集瘤胃液及瘤胃上皮样品。体外实验选取8只健康山羊,屠宰采集瘤胃上皮,胰蛋白酶消化获得瘤胃上皮细胞后进行原代培养,待24 h细胞附着后,分别接受以下处理:pH7.4、pH 6.8、pH7.4+SCFA（20 mM SCFA）与pH6.8+SCFA处理。处理24h小时,收集细胞待检。采用气相色谱法测定瘤胃内挥发性脂肪酸（SCFA）含量,用组织切片法光镜观察瘤胃上皮各层层数,细胞数量,大小和体积变化。流式细胞术检测瘤胃上皮细胞周期变... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：155 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
本文部分缩写的中英文对照
引言
第一篇 文献综述
    第一章 瘤胃上皮的生长发育及其调节
        1 瘤胃上皮的生长发育
        2 瘤胃上皮生长发育的调节
            2.1 日粮营养水平
            2.2 瘤胃内代谢产物
            2.3 激素和生长因子
        参考文献
    第二章 瘤胃上皮的结构功能及其调节
        1 瘤胃上皮的结构
            1.1 瘤胃上皮的解剖学特点
            1.2 瘤胃上皮的细胞学特点
            1.3 瘤胃上皮的超微结构
        2 瘤胃上皮的功能及其调节
            2.1 瘤胃上皮功能的发育
            2.2 SCFA的吸收
            2.3 氮的吸收
            2.4 离子的吸收
        参考文献
    第三章 细胞凋亡
        1 细胞凋亡的概况
        2 细胞凋亡的发生过程和分子机制
        3 调节细胞凋亡的主要因素
        参考文献
    第四章 细胞周期
        1 细胞周期及其调节
            1.1 细胞周期概述
            1.2 细胞周期的调控
            1.3 IGF-1对细胞周期的调节
                1.3.1. IGF-1对G1期进程的调节
                1.3.2 IGF-1的作用机制
                    1.3.2.1 IGF-1R
                    1.3.2.2 IGF-1受体后信号转导途径
            1.4 调节细胞周期的主要因素
        参考文献
第二篇 实验研究
    第一章 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞生长的影响及SCFA和pH的作用
        第一节 日粮精料水平影响山羊瘤胃上皮生长的体内研究
            1 材料与方法
                1.1 实验设计与动物饲养
                1.2 日粮化学组成检测
                1.3 样品采集
                1.4 瘤胃pH及SCFA测定
                1.5 瘤胃上皮形态观察
                    1.5.1 瘤胃上皮组织切片的制作
                    1.5.2 H.E染色
                    1.5.3 切片观察和分析
                1.6 流式细胞术检测山羊瘤胃上皮细胞周期
                    1.6.1 瘤胃上皮细胞的分离与固定
                    1.6.2 碘化丙啶（PI）染色与流式细胞仪检测
                1.7 TUNEL检测瘤胃上皮细胞凋亡指数
                    1.7.1 样品预处理
                    1.7.2 标记与检测
                    1.7.3 样品分析
                1.8 RNA提取及Real-time PCR
                1.9 数据分析
            2 结果与分析
                2.1 日粮精料水平对山羊瘤胃液pH值和SCFA浓度的影响
                2.2 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞层数和细胞数量的影响
                2.3 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞周期的影响
                2.4 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞凋亡的影响
                2.5 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响
                2.6 日粮精料水平对山羊瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响
        第二节 酸性pH及SCFA处理对原代培养山羊瘤胃上皮细胞的增殖和凋亡相关基因mRNA表达的影响
            1 材料与方法
                1.1 样品采集和细胞培养
                1.2 RNA提取及Real-time PCR
                1.3 数据分析
            2. 结果与分析
                2.1 酸性pH（pH6.8）及SCFA处理对原代培养山羊瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响
                2.2 酸性pH（pH6.8）及SCFA处理对原代培养山羊瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响
        讨论
        小结
        参考文献
    第二章 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮生长的影响及SCFA和酸性pH的作用
        第一节 日粮精料水平影响奶牛瘤胃上皮生长的体内研究
            1 材料与方法
                1.1 实验设计与动物饲养
                1.2 日粮化学组成检测
                1.3 样品采集
                1.4 瘤胃pH及SCFA测定
                1.5 瘤胃上皮形态观察
                    1.5.1 瘤胃上皮组织切片的制作
                    1.5.2 H.E染色
                    1.5.3 切片观察和分析
                1.6 流式细胞术检测奶牛瘤胃上皮细胞周期
                    1.6.1 瘤胃上皮细胞的分离与固定
                    1.6.2 碘化丙啶（PI）染色与流式细胞仪检测
                1.7 TUNEL检测瘤胃上皮细胞凋亡指数
                    1.7.1 样品预处理
                    1.7.2 标记与检测
                    1.7.3 样品分析
                1.8 RNA提取及Real-time PCR
                1.9 数据分析
            2 结果与分析
                2.1 日粮精料水平对奶牛瘤胃液pH值和SCFA浓度的影响
                2.2 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞层数和细胞数量的影响
                2.3 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞周期的影响
                2.4 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞凋亡的影响
                2.5 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响
                2.6 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响
        第二节 酸性pH及SCFA处理对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞细胞增殖和细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响
            1 材料与方法
                1.1 样品采集和细胞培养
                1.2 样品采集和细胞培养
                1.3 数据分析
            2 结果与分析
                2.1 酸性pH（pH6.8）及SCFA处理对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞增殖相关基因mRNA表达的影响
                2.2 酸性pH（pH6.8）及SCFA处理对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响
        讨论
        小结
        参考文献
    第三章 TNFα对奶牛瘤胃上皮细胞增殖和细胞凋亡的影响及其机制研究
        第一节 日粮精料水平影响奶牛瘤胃上皮cyclin D1, CDK4, A-Caspase 3,TNFα及其受体表达的体内研究
            1 材料与方法
                1.1 实验设计与动物饲养
                1.2 日粮化学组成检测
                1.3 样品采集
                1.4 蛋白提取及Western-blot检测
                1.5 数据分析
            2 结果与分析
                2.1 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮cyclin D1,CDK4和A-Caspase 3蛋白表达的影响
                2.2 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮TNFα,TNFR1,TNFR2和TRADD蛋白表达的影响
                2.3 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮ERK1/2蛋白表达的影响
                2.4 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮JNK蛋白磷酸化的影响
                2.5 日粮精料水平对奶牛瘤胃上皮p38蛋白表达的影响
        第二节 TNFα对影响原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1,CDK4和A-Caspase 3表达的体外研究
            1 材料与方法
                1.1 样品采集和细胞培养
                1.2 RNA提取及Real-time PCR
                1.3 蛋白提取及Western-bolt
                1.4 数据分析
            2 结果与分析
                2.1 TNFα对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞ERK1/2蛋白磷酸化的影响
                2.2 TNFα对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞JNK蛋白磷酸化的影响
                2.3 TNFα对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞p38蛋白磷酸化的影响
                2.4 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1与CDK4mRNA表达的影响
                2.5 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞Caspase 3 mRNA表达的影响
                2.6 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞cyclin D1蛋白表达的影响
                2.7 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞CDK4蛋白表达的影响
                2.8 TNFα及几种抑制剂对原代培养奶牛瘤胃上皮细胞A-caspase 3蛋白表达的影响
        讨论
        小结
        参考文献
全文结论
本文创新点
致谢
博士期间发表和完成的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]内质网应激介导的细胞自噬与凋亡研究进展[J]. 代景友,张新晨,杨维良,吴德全.  中华实验外科杂志. 2012 (07)
[2]细胞凋亡信号传导通路的研究进展[J]. 王力俭,田可川,吴伟伟,徐新明,张廷虎,张艳花,哈尼克孜.  中国畜牧兽医. 2011(10)
[3]自噬与凋亡相互关系的分子机制探讨[J]. 郑海燕,王兴芬,孙保存.  医学综述. 2011(01)
[4]p53基因研究进展[J]. 闫毓秀,张淑萍,滑静.  北京农学院学报. 2009(02)
[5]不同蛋白质来源对早期断奶犊牛胃肠道形态发育的影响(二)[J]. 李辉,刁其玉,张乃锋,屠焰.  动物营养学报. 2009(02)
[6]肿瘤抑制基因p53的研究进展[J]. 成秀梅.  现代诊断与治疗. 2008(03)
[7]影响犊牛瘤胃发育的因素研究[J]. 张海涛,王加启,卜登攀,周凌云,魏宏阳.  乳业科学与技术. 2008(02)
[8]反刍动物瘤胃上皮发育规律及影响因素[J]. 何军,陈代文.  中国草食动物. 2007(05)
[9]Bcl-2/Bax比率与细胞“命运”[J]. 王卫东,陈正堂.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2007(04)
[10]Bcl-2蛋白家族和p53基因在细胞凋亡中的调控效应[J]. 周桔,罗荣保,汤长发,瞿树林.  中国组织工程研究与临床康复. 2007(10)



本文编号：3150234