HDAC6限制甲型流感病毒基因的转录与复制

发布时间：2024-07-10 19:44

　　甲型流感病毒(Influenza A virus)属于正黏病毒科,流感病毒属。作为负链RNA病毒,具有易突变的特性。流感病毒RNA聚合酶,核蛋白以及病毒基因组组成核糖核蛋白复合体,是病毒基因转录与复制的最基本单元,蛋白的翻译后修饰在病毒的生命周期中起着非常重要的作用。HDAC6作为组蛋白去乙酰化酶,能够通过调控微管蛋白的细胞骨架,介导抗病毒免疫应答或者直接调控病毒蛋白参与各种病毒的生命周期。因此本研究从流感病毒与宿主蛋白HDAC6的互作出发,发现了流感病毒RNA聚合酶复合体PA蛋白的乙酰化修饰对聚合酶活性乃至病毒基因复制与转录的影响,为研究蛋白修饰对流感病毒以及其它病毒RNA聚合酶的调节作用提供参考。1.HDAC6与流感病毒RNA聚合酶相互作用流感病毒利用宿主细胞内的营养物质以及通过劫持宿主蛋白来维持自身的生命活动。宿主蛋白HDAC6通过调控微管蛋白的乙酰化状态抑制流感病毒蛋白的运输,而流感病毒则利用HDAC6介导的聚集体的形成促进自身的脱壳过程,在此过程中,基质蛋白M1,核蛋白NP能与HDAC6相互作用。而核蛋白NP与RNA聚合酶复合体紧密联系在一起,所以本研究通过免疫共沉淀,GST...

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
缩略词(Abbreviations)
第一章 文献综述
    1.1 甲型流感病毒
        1.1.1 甲型流感病毒的形态学特征
        1.1.2 甲型流感病毒蛋白
        1.1.3 甲型流感病毒的复制周期
        1.1.4 抗甲型流感病毒药物
        1.1.5 甲型流感病毒感染过程中产生的免疫反应
        1.1.6 流感病毒与宿主的互作
    1.2 组蛋白去乙酰化酶HDAC6的研究进展
        1.2.1 组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的分类
        1.2.2 组蛋白去乙酰化酶HDAC6的结构与生理功能
        1.2.3 组蛋白去乙酰化酶HDAC6的活性调节
        1.2.4 蛋白的乙酰化修饰
        1.2.5 HDAC6与应激颗粒
        1.2.6 HDAC6与聚集体和自噬的产生
        1.2.7 HDAC6与病毒
    1.3 本研究的目的和意义
    参考文献
第二章 HDAC6与流感病毒RNA聚合酶相互作用
    1. 材料与方法
        1.1 细胞系和病毒等相关材料
        1.2 相关试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 溶液的配制
        1.5 质粒的构建
        1.6 免疫共沉淀试验
        1.7 GST pull-down试验
        1.8 共聚焦免疫荧光试验
    2. 结果
        2.1 HDAC6与流感病毒RNA聚合酶复合体互作
        2.2 HDAC6对流感病毒RNA聚合酶蛋白的调控作用
        2.3 HDAC6与病毒蛋白PA直接结合
        2.4 HDAC6与病毒蛋白PA在细胞质中共定位
    3. 讨论
    参考文献
第三章 HDAC6使PA去乙酰化以促进PA蛋白的降解
    1. 材料与方法
        1.1 细胞系和质粒等相关材料
        1.2 相关试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 溶液的配制
        1.5 乙酰化和泛素化位点的质谱鉴定
        1.6 HDAC6以及PA突变体的构建
        1.7 病毒蛋白PA及其突变体蛋白稳定性的测定
    2. 结果
        2.1 HDAC6介导PA蛋白的降解依赖于其去乙酰化酶活性
        2.2 病毒蛋白PA乙酰化位点和泛素化位点的质谱鉴定
        2.3 HDAC6能介导病毒蛋白PA 664位赖氨酸的去乙酰化
        2.4 PA蛋白664位赖氨酸的乙酰化与其蛋白稳定性有关
    3. 讨论
    参考文献
第四章 HDAC6抑制流感病毒基因的转录与复制
    1. 材料与方法
        1.1 细胞系和质粒等相关材料
        1.2 相关试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 溶液的配制
        1.5 普通RT-PCR
        1.6 Q-RT-PCR
        1.7 流式细胞技术分析感染病毒的细胞量
        1.8 TCID₅₀测定流感病毒滴度
    2. 结果
        2.1 HDAC6选择性抑制剂Tubacin能促进流感病毒的释放
        2.2 过表达HDAC6能下调流感病毒基因的转录与复制水平
        2.3 过表达HDAC6抑制流感病毒的增殖
    3. 讨论
    参考文献
第五章 抑制HDAC6促进流感病毒基因的转录与复制
    1. 材料与方法
        1.1 细胞系和质粒等相关材料
        1.2 相关试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 溶液的配制
        1.5 MTT试验检测细胞增殖及细胞毒性
        1.6 干扰RNA的转染
    2. 结果
        2.1 MTT试验检测HDAC6选择性抑制剂Tubacin对细胞增殖的影响
        2.2 HDAC6选择性抑制剂Tubacin能促进流感病毒基因的转录与复制
        2.3 HDAC6选择性抑制剂Tubacin能促进流感病毒增殖
        2.4 沉默HDAC6的表达能促进流感病毒基因的转录与复制
    3. 讨论
    参考文献
第六章 HDAC6抑制流感病毒RNA聚合酶活性
    1. 材料与方法
        1.1 细胞系和质粒等相关材料
        1.2 相关试剂
        1.3主要仪器
        1.4 溶液的配制
        1.5 Mini-genome试验检测流感病毒的RNA聚合酶活性
    2. 结果
        2.1 Mini-genome试验检测HDAC6对流感病毒的RNA聚合酶活性的调节
        2.2 免疫印迹试验检测HDAC6对流感病毒RNA聚合酶活性的调节
    3. 讨论
    参考文献
全文总结
本论文创亲斤点
科研成果
致谢



本文编号：4004636